2型猪圆环病毒衣壳蛋白的表达生产

发布时间：2017-11-23 00:24

  本文关键词：2型猪圆环病毒衣壳蛋白的表达生产

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【摘要】：2型猪圆环病毒(PCV2)是一种侵略性病原,可引起猪的一系列相关疾病(PCVAD),给世界范围内的养猪业造成重大经济损失。PCV2的衣壳蛋白(Cap)是重要的保护性抗原,CapN端41个氨基酸为核定位信号序列(NLS),研究表明NLS序列中不包含蛋白的抗原表位,所以截短NLS序列后的Cap (tCap)与原蛋白相比具有相同的免疫原性,都具有开发成为PCV2亚单位疫苗的潜力。本文利用大肠杆菌,毕赤酵母,杆状病毒三个表达系统对tCap进行表达生产,为PCV2亚单位疫苗的开发打下了基础。首先,我们在大肠杆菌系统中进行了tCap的表达。将密码子优化的opti-tcap口tcap分别插入到pET28a(+)载体后转入大肠杆菌BL21菌株中表达。对表达的蛋白进行分析发现,密码子优化提升了活性tCap的表达量。收获的tCap通过双向琼脂扩散试验进行体外检测,效价达到1：8,显示出了良好的免疫原性。其次,我们在毕赤酵母GS115系统中进行了tCap的分泌表达。将密码子优化的opti-tcapl和tcap分别插入pPIC9K表达载体中,通过筛选获得表达质粒高拷贝整合的菌株,并在5L生物反应器中进行了菌株的高密度发酵。发酵液上清中检测到了tCap蛋白的分泌表达,产量达到0.25g/L。进一步在小鼠和猪模型上进行了纯化tCap蛋白的体内免疫实验,结果证明：tCap能够在动物体内激发PCV2 Cap特异性抗体的产生,其抗体激活水平与商业化亚单位疫苗相当。最后,我们在昆虫细胞Sf9系统中进行了tCap的表达。将tcap插入到pFastBacHTB转移载体中,通过转座交换到杆状病毒质粒bacmid上。将重组杆状病毒质粒Bacmid-tcap转入Sf9细胞中,收获病毒,并用P3代病毒感染细胞以表达tCap。实验结果表明：杆状病毒表达的可溶性tCap具有良好的免疫原性,体外能够检测到1倍抗体效价。
【学位授予单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.651

【参考文献】

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本文编号：1216606