鼠源白细胞介素-4重组乳酸菌对旋毛虫免疫保护效果研究

发布时间：2017-11-25 16:17

  本文关键词：鼠源白细胞介素-4重组乳酸菌对旋毛虫免疫保护效果研究

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【摘要】：旋毛虫(Trichinella spiralis)感染能特异性诱导宿主机体产生Th2类细胞因子。白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)作为重要的Th2细胞因子,在抗寄生虫感染中扮演着重要角色。宿主感染旋毛虫后,IL-4会活化相关效应细胞,使其释放出组织胺、血清素等造成平滑肌收缩增强,从而促进肠道中旋毛虫的排出。乳酸菌作为一种重要的益生菌,可调节胃肠道内环境,提高机体免疫力,也能作为外源蛋白的递送载体。前期研究发现BALB/c小鼠进行乳酸菌口服免疫后,可在一定程度上抵抗旋毛虫的感染及寄生。本研究使用乳酸菌作为基因工程菌表达鼠源白细胞介素-4,并研究了其对旋毛虫的免疫保护效果,为抗旋毛虫新型疫苗的开发奠定了基础。具体研究内容及结果如下:(1)鼠源白细胞介素-4(mIL-4)重组乳酸菌的制备:将生物公司合成的含有pMD18-T-mIL-4质粒的菌株进行质粒提取及双酶切,得到mIL-4片段,将mIL-4片段与带有表面展示基因的大肠杆菌乳酸菌穿梭表达载体(pSIP409-pgs A)进行连接,构建重组质粒pSIP409-pgsA-mIL-4,并将其电转入乳酸菌感受态内,构建鼠源白细胞介素-4重组乳酸菌。通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白印迹试验(Western blot)在58kD处发现条带,验证了所构建的重组菌成功的表达了mIL-4蛋白且表达的mIL-4蛋白具有反应原性。(2)mIL-4重组乳酸菌对旋毛虫免疫保护效果的研究:将60只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每20只一组。其中Control组以PBS进行免疫接种,阴性对照组;乳酸菌组(LAB NC8组)以普通的植物乳杆菌NC8(Lactobacillus Plantarum NC8)进行免疫接种,阳性对照组;鼠源白细胞介素-4重组乳酸菌组(重组菌组),以mIL-4重组乳酸菌进行免疫接种,试验组。具体免疫流程如下:将第一次免疫记为第-21d,在第-21、-20、-19d,连续免疫三次作为初次免疫,之后第-14、-13d及第-7,-6d进行加强免疫。第0d每只小鼠经口灌服500条旋毛虫,建立旋毛虫感染模型。于第-1、7、14、21d通过流式细胞术(FCM)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、淋巴细胞增殖试验对小鼠脾脏(Spleen,SPL)、派伊尔淋巴结(Pyle Peye,PP)及肠系膜淋巴结(Mesenteric Lymph Nodes,MLN)中淋巴细胞的生长分化、增殖情况等免疫指标的变化进行检测。结果发现,重组乳酸菌组小鼠脾脏、肠系膜淋巴结和派尔集合淋巴结中IFN-γ含量较其它两组的低;T淋巴细胞表面标志CD4+表达水平、IL-4及IL-10的含量较灌服乳酸菌组及对照组的含量明显增高;重组菌组淋巴细胞增殖能力最强,与乳酸菌组相比差异显著(P0.05),与对照组相比差异极显著(P0.01);于第7、14、21d通过ELISA试验对小鼠血清中IgG1进行检测,结果发现:第7d时,重组菌组小鼠血清中IgG1水平极显著高于乳酸菌组(P0.05)和对照组(P0.001),乳酸菌组与对照组相比差异极显著(P0.01);第14d时,重组乳酸菌组小鼠血清中IgG1水平与乳酸菌组相比差异极显著(P0.01),与对照组相比差异极显著(P0.001);第21天时,重组乳酸菌组小鼠血清中IgG1水平与乳酸菌组相比差异极显著(P0.01),与对照组相比差异极显著(P0.001),乳酸菌组与对照组相比差异极显著(P0.01);于第7、14、21d通过ELISA试验对小鼠肠内容物中SIgA水平进行检测发现,第7d时,重组乳酸菌组相比乳酸菌组差异显著(P0.05),与对照组相比差异极显著(P0.01),乳酸菌组与对照组相比差异极显著(P0.01);第14d时,重组菌组相比乳酸菌组差异显著(P0.05),相比对照组差异显著(P0.05);第21d时,重组菌组与对照组相比差异显著(P0.05)。第7天做肠道成虫计数,从数据得知,重组菌组成虫数在三组之中最少,与乳酸菌组的数据比较差异显著(P0.05),与对照组的数据比较差异显著(P0.05);第28d进行肌肉幼虫虫荷检测,其中重组菌组幼虫数最少,与乳酸菌组比较差异显著(P0.05),与对照组比较差异极显著(P0.01);乳酸菌组肌幼虫数比对照组明显减少,差异极显著(P0.01)。以上研究表明鼠源IL-4重组乳酸菌能提高机体肠道粘膜免疫水平,有效促进肠道旋毛虫成虫的排出,阻碍幼虫移行,从而发挥抗旋毛虫寄生作用。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.7

【参考文献】

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本文编号：1226640