家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库的构建及鉴定

发布时间：2017-11-29 00:04

  本文关键词：家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库的构建及鉴定

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【摘要】：本研究旨在构建家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库,并选用已知表位序列的单克隆抗体对VP60基因特异性肽库进行鉴定,以确定所构建肽库的特异性和丰富性。利用DNA酶Ⅰ随机消化法构建VP60基因噬菌体随机肽库。采用生物淘选和噬菌体原位杂交技术,选用1B8、1D4、5H3和A3C 4株纯化的单克隆抗体对该肽库进行抗原表位的鉴定。结果显示,所构建多肽库的滴度约为2.6×1012 PFU/m L,能够满足鉴定VP60蛋白的抗原表位的要求,同时鉴定到4条与VP60蛋白高度同源的序列,分别为N(326)PISQV(331)、D(338)MSFV(342)、K(562)STLVFNL(569)和G(25)TTTDGMDPGVVAA(38),与已知单抗所对应的表位序列高度同源。本研究成功构建了家兔出血症病毒VP60基因特异性随机肽库,选用已知表位序列的单克隆抗体对构建的肽库进行鉴定,鉴定到的表位与目前已经报道的单抗针对的表位序列高度同源,表明所构建肽库的特异性和丰富性良好,为进一步筛选和丰富VP60抗原表位奠定基础,还可用于VP60与受体结合域的鉴定,对阐述RHDV的感染、致病和免疫保护机制具有重要意义。
【作者单位】： 南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心;
【基金】：现代农业产业技术体系建设兔体系病毒病预防与控制岗位项目(CARS-44-C-1) 国家自然科学基金项目(31502073) 江苏省自然科学基金资助项目(BK20140740)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 是由家兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)引起的一种家兔的毁灭性传染病[1]。RHDV基因组由大小约为7.5 kb的单股正链RNA组成[2]。RHDV的衣壳蛋白的分子质量为60 ku,故称为VP60,是病毒衣壳的最基本单位[3]。Laurent等[4]对抗RHDV单克隆抗体的生产及其特性进

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本文编号：1235451