副猪嗜血杆菌病原夹心ELISA检测方法的建立及应用

发布时间：2017-11-30 14:27

  本文关键词：副猪嗜血杆菌病原夹心ELISA检测方法的建立及应用

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【摘要】：为了建立一种准确、快速的副猪嗜血杆菌病原夹心ELISA检测方法,以副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的特异性单克隆抗体1E2作为捕获抗体,兔抗副猪嗜血杆菌多克隆抗体作为检测抗体,通过方阵滴定优化夹心ELISA检测方法最佳反应条件,并对该检测方法进行特异性、敏感性验证以及临床样品的检测应用。结果显示,该检测方法中单克隆抗体1E2最佳包被浓度为3.434μg/m L,兔抗副猪嗜血杆菌多抗的最佳稀释浓度为3.350μg/m L,用10 mg/m L明胶37℃封闭1 h优于其他封闭液,辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔多体最佳使用浓度为1∶4 000。该检测方法的特异性试验结果显示可检测出15个血清型的副猪嗜血杆菌病原,而与其他病原菌的检测结果均为阴性。敏感性试验结果显示该方法能够检测出副猪嗜血杆菌的最低菌落浓度为1×106cfu/m L。利用该检测方法对临床115份副猪嗜血杆菌可疑病料进行检测结果显示可检出83份阳性样品,检出的阳性样品数高于细菌分离及PCR鉴定方法。上述结果表明所建立的副猪嗜血杆菌病原夹心ELISA检测方法特异性强、敏感性好并可应用到临床样品的检测。
【作者单位】： 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东省兽医公共卫生实验室粤北生猪生产及疫病防控协同创新发展中心;仲恺农业工程学院动物科学系;
【基金】：广东省公益研究与能力建设专项资金(2014B070706011;2015B070701015) 广东省农业领域科技计划项目(2013B020307002) 广州市新型畜禽疫病诊断试剂研发及产业化(201508020055) 广州市重大民生专项(201300000066) 国家“十二五”科技支撑计划项目(2015BAD12B02-4)
【分类号】：S858.28
【正文快照】： 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是一种多形态、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖型、不运动的革兰氏阴性细小杆菌,属于巴斯德杆菌科嗜血杆菌属。该病原能引起猪的多发性浆膜炎、关节炎以及脑膜炎为主要特征的猪革拉泽氏病(Gl錬sser's disease)[1-2]。利用传统的血清学

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本文编号：1239646