基于上转发光技术对鼠疫菌在感染鼠脏器中的分布及致病关联的研究

发布时间：2017-12-04 09:10

  本文关键词：基于上转发光技术对鼠疫菌在感染鼠脏器中的分布及致病关联的研究

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【摘要】：鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis,以下简称鼠疫菌)主要可以引起腺鼠疫、肺鼠疫以及败血症型鼠疫。主要表现为发热、寒战、头痛乏力,并伴有严重毒血症症状、全身酸痛且烦躁不安淋巴结肿大、肺炎、出血倾向等。而在自然界中,鼠疫主要是在啮齿类动物与跳蚤之间相互传播并繁殖。纵观历史上共有三次鼠疫的大规模爆发,而其中的第二次鼠疫更是绵延了数百年,造成了数以千万计的死亡,由于鼠疫菌有着传播快、感染性强、致死率高等特点,因此对它的的检测以及其在感染鼠体内脏器中的分布及致病关联研究十分必要。本研究主要实验内容如下:选取30只8周龄的雌性BALB/c小鼠对其进行分组并通过腹腔、滴鼻、静脉注射等方式进行鼠疫菌攻毒后,10只一组分离饲养并每隔8小时观察小鼠的情况(精神状态、食欲、背毛等),并每组随机小鼠进行脱颈处死取材(心、肝、脾、肺)研磨制备为待测液后与标记了鼠疫抗体的上转发光颗粒进行混匀结合,最后通过流式细胞仪对制备好的样品进行检测,观察患鼠疫小鼠不同脏器内的鼠疫菌分布情况并对其致病关联性进行讨论。目的:将上转换发光颗粒(Up-converting Phosphor,UCPs)作为标记物应用于免疫检测,充分利用其独特的上转换发光性质,对鼠疫菌抗体进行标记,然后应用流式细胞术对其在患病小鼠体内各个脏器分布情况进行检测,实现对不同脏器内鼠疫菌分布的灵敏快速检测。方法:对直径大小约为50nm的UCP颗粒的表面进行一系列的修饰活化包括氨基化(添加氨基基团)与醛基化(添加醛基基团)然后将其与鼠疫特异抗体相标记,之后与制备好的感染鼠疫脏器单细胞悬液混合孵育后经过流式细胞仪检测,评价分析不同脏器中鼠疫菌的分布情况以及与致病性的关联并通过成熟的试纸条层析技术对检测结果加以佐证;结果:(1)优化了上转发光颗粒的修饰过程,并通过透射电子显微镜对修饰后的颗粒进行观察发现,经过修饰后的颗粒可以粒径大小均一,在溶液中有着良好的分散性,为其作为生物标记奠定了基础;(2)建立了基于上转发光技术的对鼠疫菌的试纸条免疫层析方法;(3)建立了基于上转发光的流式检测技术,并可以对鼠疫耶尔森氏菌完成快速的分析检测;结论:结合了上转发光技术的流式细胞检测技术可以对鼠疫菌完成快速、精准的检测,并具有良好的灵敏性与特异性,为防范生物性恐怖袭击、了解鼠疫菌致病关联、以及应对突发疫情提供了强有力的检测手段。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S855

【参考文献】

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本文编号：1250466