表达堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的三种重组乳酸乳球菌构建与鉴定

发布时间：2017-12-05 10:21

  本文关键词：表达堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的三种重组乳酸乳球菌构建与鉴定

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【摘要】：为探索堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)表面抗原3-1E基因在乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中的不同表达形式,首先通过PCR扩增3-1E目的基因片段,克隆入pTX8048载体中,构建胞内表达质粒p TX8048-3-1E;将乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)信号肽(SP)与3-1E基因片段融合(SP-Δ3-1E),并克隆入pTX8048中,构建分泌表达质粒pTX8048-SP-Δ3-1E;将化脓性链球菌M6蛋白细胞壁锚定序列(Cell wall anchor,CWA)克隆入pTX8048-SP-Δ3-1E中的Δ3-1E下游(去除Δ3-1E终止密码子,即NAΔ3-1E),构建表面表达质粒pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA;将三种表达载体电转化到乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中,构建三种乳酸乳球菌L.lactis NZ9000/pTX8048-3-1E(胞内表达菌)、L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-Δ3-1E(分泌表达菌)及L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA(表面表达),通过Western blot来检测3-1E目的蛋白在三种阳性乳酸乳球菌中的表达。结果表明,构建的三种重组乳酸乳球菌均可表达目的蛋白。研究结果为进一步评估重组乳酸乳球菌的抗球虫免疫保护作用及后续非抗性标记乳酸菌体系建立奠定基础。
【作者单位】： 东北农业大学动物医学学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(30901061) 黑龙江省自然科学基金资助项目(C201422) 黑龙江省博士后启动金项目(LBH-Q14019)
【分类号】：S852.723
【正文快照】： 顶复门艾美耳属的艾美耳球虫引起的鸡球虫病严重危害世界养禽业发展。目前该病的防控方法主要采用化学药物和致弱虫苗,但存在不足之处。近年来,基于鸡球虫无性生殖阶段子孢子和裂殖子表面的保守抗原进行的基因工程疫苗研制倍受关注。研究表明,3-1E基因编码鸡艾美耳球虫子孢子

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本文编号：1254476