雏鸭原代肝细胞培养及DHAV-1致肝细胞损伤的研究

发布时间：2017-12-14 20:27

  本文关键词：雏鸭原代肝细胞培养及DHAV-1致肝细胞损伤的研究

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【摘要】：肝脏参与多种代谢过程,是人和动物的重要的器官。各种致病因子可直接或间接作用于肝脏,导致其结构和或功能异常。这些致病因子主要包括病原微生物、毒素、药物等。鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)感染4周龄内雏鸭后,造成雏鸭的急性死亡,病变表现为肝脏的出血、坏死、胆管增生、脂肪变性;并可以在鸡胚尿囊膜、鸡胚成纤维细胞、鸭胚肾细胞和肝细胞等细胞中增殖,造成细胞病变。致病因子的性质不同,肝损伤的机制不同。在研究肝损伤相关机制时发现DHAV-1感染雏鸭后表现为高血脂和低血糖,肝内脂代谢异常,脂肪含量增多。基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)9、Notch1基因会引起病理条件下的肝脏出血、坏死及胆管增生,因此本试验在建立雏鸭DHAV-1感染模型的基础上,试图研究DHAV-1对雏鸭肝脏的损伤过程中肝脏中脂肪代谢相关基因、MMP-9、Notch1发挥的作用。第一部分:试验成功的培养了雏鸭原代肝细胞,并建立DHAV-1感染雏鸭原代肝细胞模型。运用QPCR研究雏鸭原代肝细胞和雏鸭肝脏内的甘油二酯酰基转移酶2(Diacylglycerol acyltransferase 2,DGAT2)、甘油三酯脂肪酶(Adipose triglyceride lipase,ATGL)、微粒体甘油三酯转运蛋白(Microsomal triglyceride transfer protein,MTP)基因表达水平。结果显示:雏鸭原代肝细胞感染DHAV-1后DGAT2和ATGL呈升高的趋势,MTP表达是下降的,感染组细胞培养上清中的游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)含量8h最低,然后24h后上升。雏鸭感染组中肝脏DGAT2和ATGL基因转录水平上均呈升高的趋势,MTP在12h降低,24h表达升高,随后呈降低趋势。说明雏鸭原代肝细胞和雏鸭肝脏中的蓄积的脂肪为甘油三酯(Triglyceride,TG),且MTP在TG的蓄积中发挥重要作用。第二部分:运用QPCR研究病毒感染后雏鸭肝脏中核调节因子-κB(Nucleus factor-κB,NF-κB)、MMP-9、血小板内皮细胞粘附因子(Platelet endothelial cell adhesion molecule,PECAM)1、Jagged1、Notch1及Notch2的表达,运用Western Blot检测MMP-9蛋白表达。结果表明:NF-κB基因转录水平24h显著升高,之后呈升高趋势。MMP-9基因转录水平在24h开始均呈升高趋势,其中24h最高;MMP-9蛋白在24h升高。感染组与无感染对照组相比PECAM-1基因表达在12h到36h变化小,基因表达较稳定,48h表达降低,72h又恢复稳定。Notch2和Jagged1的表达均降低,而Notch1的表达呈上升的趋势,且在72h达到最高。说明:NF-κB、MMP-9、PECAM-1在雏鸭病毒性肝炎的肝出血、坏死的过程发挥重要的生物学作用;Notch1参与了该病肝胆管增生的过程。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.32

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本文编号：1289285