漆黄素对单增李斯特菌感染妊娠小鼠流产的保护作用

发布时间：2017-12-15 10:30

  本文关键词：漆黄素对单增李斯特菌感染妊娠小鼠流产的保护作用

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【摘要】：单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes;L.monocytogenes)简称单增李斯特菌,是李斯特菌病的唯一病原菌,该病有着很高的病死率。单增李斯特菌是革兰氏阳性细菌,同时也是胞内寄生菌,因其可以借助毒力因子的作用,突破吞噬泡膜和细胞胞膜的束缚作用,在细胞内和细胞间大量的繁殖和生长,并且可以穿透肠屏障、血胎屏障和血脑屏障,引起较为严重的肠胃炎疾病,母胎的感染以及神经性的疾病。根据现有的资料显示,能够穿透血胎屏障并引起疾病的病原微生物只有少数不多的几种,而单增李斯特菌就是其中之一。但究其能够穿透血胎屏障的机制和原理到目前为止仍然没有较为全面和肯定答案,这同时也为治疗该菌所引起的疾病带来了很大的困难。但越来越多的证据显示病原微生物之所以能够引起胎儿感染并最终导致流产等不良妊娠结果,是因为能够在胎盘大量繁殖并且引起胎盘滋养层细胞的死亡和炎症反应,并最终突破胎盘屏障而进入胎儿。随着人们对抗生素大量使用,使得细菌所致流产等疾病在一定程度上得到了控制,然而细菌耐药性的出现再次引起了人们的思考,有没有更为行之有效的方法能够不引起耐药同时达到治疗疾病的效果呢?我们实验室将目光集中在细菌的毒力因子上,而单增李斯特菌溶血素(listeriolysin O;LLO)具有裂解吞噬泡,细菌逃逸至细胞质中增殖的重要作用,是该菌最为重要的毒力因子之一。具有分泌LLO的细菌能够逃脱细胞吞噬泡的作用,在胞内和胞间大量的繁殖,而LLO敲除子却不具有这些功能,最终会被吞噬溶酶体裂解而死亡,使细菌无法引起胎盘的感染,并且穿透血胎屏障,引起胎儿的感染。我们的实验小组已经充分的证明了漆黄素能够有效的抑制LLO的寡聚化作用,从而显著的抑制了单增李斯特菌从细胞吞噬泡中逃逸的作用,最终达到了治疗单增李斯特菌所引起的小鼠死亡以及肝脏和脾脏的病理变化,起到了很好的保护作用。那么我们就设想漆黄素是不是也可以对被单增李斯特菌感染的妊娠小鼠有保护作用呢?因此我们用野生型的细菌株EGD和LLO敲除株EGD△hly感染怀孕14.5天的妊娠小鼠,然后每隔8小时注射一次漆黄素,在第42小时后,将小鼠处死采取胎儿、胎盘和子宫的样本。我们发现,没有给药的阳性对照组,小鼠的流产率高达80%,而药物组和敲除株阴性对照组基本没有小鼠流产现象。而倍比稀释菌落基数发现在胎盘、胎儿和子宫药物组的细菌数明显少于阳性组。ELISA和Western blot实验同时也说明了漆黄素显著的减弱了细菌所引起的细胞死亡和炎症反应。从胎盘的组织切片可以看出药物组的胎盘结构趋于完整有序,细胞渗出减少,血液交换功能基本正常。通过以上的实验充分说明了漆黄素显著的抑制了单增李斯特菌所引起的小鼠流产和组织的病理变化。而为了进一步探究漆黄素对胎盘的作用,我们采用胎盘滋养层细胞Be Wo细胞建立体外感染模型,发现漆黄素对滋养层细胞的细胞死亡抑制作用显著。药物处理后的胞内细菌数也明显的少于阳性组。综上所述,我们充分的验证了漆黄素是通过抑制LLO的寡聚化作用,从而抑制了细菌胞内和胞间大量繁殖,减弱细菌对胎盘的破坏作用,最终达到了抑制流产以及胎儿感染的作用。中药是我华夏民族的瑰宝,是几千年来炎黄子孙一代又一代人传承下来的宝贵财富。随着中国科学研究的发展,中药对各种疑难疾病治疗效果被世人所认可,得到了更为广泛的研究和发展,为人类的健康做出了不和磨灭的贡献。而中药成分中黄酮类的化合物更是被证明拥有丰富的生物活性,在抗炎抗氧化等众多疾病的治疗过程中作用显著。而漆黄素作为黄酮类化合物的重要成员更是被广泛的应用在各种临床的疾病治疗过程中。通过本实验,我们进一步完善了漆黄素对抗单层李斯特菌病的实验数据,为该药的临床应用提供充足的理论依据。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61

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