鸡LEAP-2抗菌肽基因的克隆及蛋白的表达和纯化

发布时间：2017-12-15 22:32

  本文关键词：鸡LEAP-2抗菌肽基因的克隆及蛋白的表达和纯化

  更多相关文章： 抗菌肽 LEAP-2 融合表达 Western Blot 抗菌活性检测

【摘要】：抗菌肽LEAP-2 (liver expressed antimicrobial peptide-2, LEAP-2)是自然界里天然的抗生素,能够杀灭的细菌种类分布范围大,还拥有抑制真菌,肿瘤细胞与病毒的功能。但它多数动物细胞没有毒性,所以有很好的研究前景和意义。这些年关于家禽的LEAP-2的相关探索才刚开始,本课题主要研究鸡的LEAP-2.本实验应用了网上生物信息软件对鸡LEAP-2基因和蛋白序列进行分析,本研究在体外使用了原核表达体系制备鸡抗菌肽LEAP-2。基于鸡抗菌肽LEAP-2 mRNA的已知序列(序列号：NM 001001606)来设计一对引物,同时以肉鸡肝脏总RNA为模板扩增出了LEAP-2 CDS区的序列,构建了pGEX-6P-1-LEAP-2的重组质粒,用此转化大肠杆菌BL21来进行了诱导表达、纯化及SDS-PAGE、Western Blot检测,对纯化后的融合蛋白进行了融合头的切割,对融合蛋白GST-LEAP-2和鸡抗菌肽LEAP-2进行体外抗菌活性检测。结果：成功构建了融合表达载体pGEX-6P-LEAP-2,并成功地表达了鸡LEAP-2融合蛋白；融合表达产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有一定的抑菌作用,融合蛋白经切割后产生的鸡抗菌肽LEAP-2显示出更强的抗菌活性。结论：生物信息学的分析为进一步探究鸡抗菌肽LEAP-2的其他功能和后续的实验提供了相关的理论依据；成功地构建了鸡LEAP-2的融合表达体系,目的蛋白大小在8KD左右,体外抗菌活性检测表现出一定的抗菌活性,为研究在其他动物身上类似的抗菌肽提供了研究基础。
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 布冠好,李宏基,杨国宇,汪国和;抗菌肽的作用特点及应用前景[J];动物医学进展;2005年03期

2 崔艳红;黄现青;;抗菌肽的抗菌机理及其应用[J];中国兽医杂志;2006年09期

3 张召兄;潘晓亮;任耀军;;抗菌肽概述及抗菌分子机理的研究进展[J];草食家畜;2006年04期

4 李明魁;郭菊;张遂平;;抗菌肽的研究与应用[J];现代畜牧兽医;2007年01期

5 杨微;高阳;王煜;周宏璐;;抗菌肽及其在农业上应用的研究进展[J];安徽农学通报;2008年15期

6 申艮宝;栗永茂;李伟;吴光旭;;水产动物抗菌肽研究概况[J];安徽农业科学;2010年09期

7 李书伟;晏家友;;抗菌肽的研究进展[J];四川畜牧兽医;2010年05期

8 蔡灵;;抗菌肽来源及其应用进展[J];安徽农业科学;2013年13期

9 叶星,白俊杰;抗菌肽的研究及其在水产上的应用前景[J];大连水产学院学报;2000年04期

10 赵红霞 ,詹勇 ,许梓荣;动物抗菌肽及其基因工程[J];江西饲料;2002年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 徐家萍;王成林;杨莹;尤征英;;多功能抗菌肽及其分子改造的研究进展[A];华东·华中地区第十二次蚕种学术研讨会论文集[C];2010年

2 孙振钧;;蚯蚓抗菌肽研究进展[A];畜牧业环境、生态、安全生产与管理——2010年家畜环境与生态学术研讨会论文集[C];2010年

3 尚德静;白冰;李晓帆;付欣;郑俊杰;;中国林蛙(Rana chensinensis)皮肤抗菌肽基因和功能多样性研究[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年

4 黄自然;黄亚东;温刘发;郑青;廖富频;胡建雄;黄国庆;姜丽华;黄永彤;李运南;梁淑娃;彭中建;董加喜;夏枫耿;陈松彬;;抗菌肽生物工程及其应用[A];全国桑树种质资源及育种和蚕桑综合利用学术研讨会论文集[C];2005年

5 廖富，

本文编号：1293694