猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株PCR鉴别方法的建立

发布时间：2017-12-16 18:34

  本文关键词：猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株PCR鉴别方法的建立

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【摘要】：猪伪狂犬病是危害世界养猪业的重要疫病之一。近年来我国免疫猪群出现暴发、流行,经证实其抗原性和毒力发生了变异。为了有效区分变异毒株和经典毒株,根据国内外伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株和经典毒株基因序列比对结果,针对UL44和UL36区域的基因序列设计了2对引物,建立两步法PCR。第一步PCR针对UL44区域,区分出经典毒株(疫苗株HB98除外)感染与变异毒株感染。第二步PCR针对UL36区域,区分出HB98株与伪狂犬病病毒变异毒株。两步法PCR的敏感度分别达到2~20TCID50和50TCID50病毒量。对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、日本脑炎病毒、脑心肌炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核酸应用此方法进行扩增,结果均为阴性。该方法与猪伪狂犬病病毒国家标准PCR检测方法的符合率达到91%,可用于实验室快速诊断。
【作者单位】： 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;
【基金】：国家生猪产业技术体系专项(CARS-36)
【分类号】：S852.651
【正文快照】： 1.4病毒DNA的提取取250 L伪狂犬病病毒液,使用O m ega公司的病毒DNA试剂盒,按说明书操作,提取病毒基因组,用50 L双蒸水溶解作为DNA模板,-20℃保存备用。1.5两步法PCR第一步PCR:PCR反应体系:Taq M ix 12.5 L(+0.1 L r T aq),蒸馏水1.5 L,DMSO 2.5 L,10mol/L上游引物1F-C、下游

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本文编号：1297065