β-内酰胺类抗生素耐药对化脓隐秘杆菌NanH表达量及粘附性的影响

发布时间：2017-12-17 15:06

  本文关键词：β-内酰胺类抗生素耐药对化脓隐秘杆菌NanH表达量及粘附性的影响

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【摘要】：化脓隐秘杆菌是一种革兰氏阳性棒状杆菌,可引起多种动物的化脓性感染,给养殖业带来严重的经济损失。目前,常使用抗菌药物来治疗化脓隐秘杆菌所致的感染,但是随着抗菌药物特别是β-内酰胺类抗生素的广泛应用,关于化脓隐秘杆菌分离株耐药性的报道也越来越多。细菌耐药性的产生不仅使抗菌药物的治疗效果下降,还可能引起细菌毒力因子及致病性的改变。化脓隐秘杆菌具有多种毒力因子,其中神经氨酸酶NanH是其重要毒力因子之一,主要在化脓隐秘杆菌感染动物的过程中起到粘附宿主细胞的作用。本文通过检测对β-内酰胺类抗生素不同耐药表型的化脓隐秘杆菌分离株之间NanH的表达量及对Hela细胞的粘附性的差异,分析β-内酰胺类抗生素的耐药对化脓隐秘杆菌NanH表达量、细胞粘附能力的影响,将为深入研究化脓隐秘杆菌的致病机理奠定基础。本试验构建了化脓隐秘杆菌nanH基因的原核表达质粒pEASY-E1-nanH,在大肠杆菌中获得可溶性表达；利用Ni-NTA方法将表达蛋白纯化,以纯化后的His-NanH重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗化脓隐秘杆菌NanH多克隆抗体。所制备的多克隆抗体与天然化脓隐秘杆菌NanH具有良好的反应性,抗体效价达到1：1280000。利用Western-blot技术检测化脓隐秘杆菌分离株NanH的表达量,并与标准株NanH表达量进行比对。结果表明,对p-内酰胺类抗生素耐药表型不同的12株化脓隐秘杆菌NanH表达量存在一定的差异,其中2株分离株NanH表达量极显著高于标准株,7株极显著低于标准株,1株显著低于标准株,2株差异性不显著。NanH表达量最高的分离株是RY04-2,表达量高达标准株的4.03倍。分离株TEW01的NanH表达量最低,仅为标准株的1/12.5。结合12株化脓隐秘杆菌分离株对β-内酰胺类抗生素耐药情况分析,结果显示,化脓隐秘杆菌分离株NanH表达量随着p-内酰胺类耐药性的增加呈增加趋势。细胞粘附试验表明,NanH表达水平极显著高于标准株的2株分离株对Hela细胞的粘附性也极显著高于标准株。在表达量较低的4株分离株中,对Hela细胞的粘附性也最低,说明化脓隐秘杆菌对Hela细胞的粘附性随着NanH表达量增加呈增强的趋势。并且结合12株化脓隐秘杆菌分离株对p-内酰胺类抗生素耐药情况分析,耐3种或4种药物的分离株,对Hela细胞的粘附性显著高于标准株,且高于大部分对2种或者2种以下药物耐药的分离株。表明化脓隐秘杆菌NanH的表达量和粘附性随化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性的增强而呈增加的趋势。本研究成功制备了兔抗化脓隐秘杆菌NanH多克隆抗体,并检测了化脓隐秘杆菌分离株NanH表达量及对Hela细胞的粘附作用,进一步揭示了化脓隐秘杆菌NanH的表达量和粘附性随化脓隐秘杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性的增强而呈增加的趋势。本研究为深入探讨化脓隐秘杆菌的致病机理,有效防治化脓隐秘杆菌感染性疾病奠定了基础。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61

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1 耿健;β-内酰胺类抗生素耐药对化脓隐秘杆菌NanH表达量及粘附性的影响[D];沈阳农业大学;2016年

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本文编号：1300539