高黏附性兔源乳酸菌筛选及其对哺乳仔兔肠道菌群和黏蛋白表达的影响

发布时间：2017-12-19 03:00

  本文关键词：高黏附性兔源乳酸菌筛选及其对哺乳仔兔肠道菌群和黏蛋白表达的影响

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【摘要】：由于免疫系统和消化系统发育不完善,断奶仔兔易感染致病菌,死亡率较高。益生乳酸菌能有效调节动物肠道微生态平衡,提高肠黏蛋白表达,增强黏液屏障功能,对肠道疾病具有一定防治作用,且同源添加效果更优。此外,益生菌对宿主黏液层和上皮细胞的黏附能力是其稳定定植的前提。为开发仔兔用益生乳酸菌活菌制剂,本研究拟从哺乳仔兔肠黏膜分离筛选出高黏附乳酸菌,探究早期添加对断奶仔兔生产性能、肠道菌群和黏蛋白表达的影响,为有效防治断奶仔兔肠道疾病和促进生长提供理论依据。主要结果如下:1.从5、7、10日龄仔兔小肠黏膜分离得到20株疑似乳酸菌株,与3株兔源干酪乳杆菌(分别命名为L.a1、L.a2、L.a3)共同评价抑菌特性。7株具有明显抑菌性的菌株经16S rRNA基因序列比对分析鉴定为屎肠球菌(分别命名为E.f1、E.f2和E.f3),短乳杆菌(命名为L.b),植物乳杆菌(分别命名为L.p1、L.p2和L.p3)。3株干酪乳杆菌的抑菌活性最高,显著高于菌株L.p2和L.p3(P0.05),其余菌株抑菌性较弱。2.检测试验一得到的10株菌对不同pH人工胃液、不同胆盐浓度的耐受能力,兔小肠黏蛋白的黏附能力、表面疏水性及自聚合能力。菌种间比较结果显示,3种乳酸菌对不同pH条件下的人工胃液的耐受性无显著差异(P0.05),其中植物乳杆菌对0.2%、0.3%浓度胆盐的耐受能力显著高于干酪乳杆菌和粪肠球菌(P0.05),屎肠球菌的黏附性和疏水性显著低于植物乳杆菌和干酪乳杆菌(P0.05);不同菌株间相互比较发现,在pH3.0人工胃液中,L.p1、L.p2、L.p3、L.a2、E.f1和E.f3的耐受性较高(P0.05);L.p1、L.p2在0.3%胆盐中活菌数最多(P0.05),L.a2次之。L.p2和L.a2对黏蛋白的黏附率较高,二者间无显著差异(P0.05),但显著高于L.b和E.f(P0.05)。L.p2、L.a3、L.a2的表面疏水能力较高,且均显著高于L.b和E.f(P0.05)。L.p2和L.a2的自聚合能力显著高于其他菌株(P0.05)。从整体看,各菌株间的疏水性和黏附性之间基本呈现正相关性。综合各指标,L.p2和干酪乳杆菌L.a2黏附性能较高,且耐受pH3.0的人工胃液和0.3%的胆盐,具有良好的体外益生效果。3.选取高黏附的L.p2和L.a2,探究单独灌服及共同灌服对哺乳仔兔生产性能、肠组织形态、菌群数量及黏蛋白表达的影响,以检验其体内益生效果。选取40只5日龄仔兔,均分为4个处理组:对照组(CON)每天口腔灌服生理盐水;L.p2组和L.a2组分别每天灌服L.p2、L.a2菌液109 CFU/mL;L.p2+L.a2组每天灌服等比例的混合菌液。结果显示,混合灌服显著增加仔兔补饲前(8~13 d)平均日增重(P0.05),断奶时空肠、回肠绒毛高度及肠腺比(P0.05);单独灌服L.p2显著提高回肠绒毛高度,空肠、回肠MUC1和MUC2基因的表达(P0.05);单独灌服L.a2显著提高了空肠MUC1的mRNA相对表达量(P0.05)。各处理组的十二指肠、空肠、回肠杯状细胞密度、补饲后日增重、平均日增重及脾脏指数、蚓突指数均无显著变化(P0.05),但空肠、回肠总菌中大肠杆菌的相对比例均显著降低(P0.05),回肠乳酸杆菌的相对比例显著增加(P0.05)。综上所述,给哺乳仔兔灌服高黏附植物乳杆菌(L.p2)能够显著提高断奶时回肠乳酸菌相对比例,减少空肠、回肠大肠杆菌相对比例,促进回肠绒毛生长和空肠、回肠黏蛋白MUC1、MUC2的表达。基于本研究结果,高黏附兔源植物乳杆菌(L.p2)在体内外均具有良好的益生菌特性,适合开发为兔用益生菌。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S829.1

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本文编号：1306601