牦牛发情周期中Ovn在输卵管的表达及EGF对其表达的影响

发布时间：2017-12-25 13:01

  本文关键词：牦牛发情周期中Ovn在输卵管的表达及EGF对其表达的影响　出处：《甘肃农业大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：输卵管蛋白(Ovn)具有促进受精和早期胚胎发育的作用,但有关Ovn分子特征及其在发情周期表达的研究甚少。本研究采用RT-PCR法克隆了牦牛Ovn cDNA序列,并采用qRT-PCR和免疫组织化学方法检测了在卵泡期前期、卵泡期后期、黄体期前期及黄体期后期输卵管伞部和壶腹部Ovn的表达差异,从基因和蛋白水平分析牦牛发情周期输卵管中Ovn表达的变化。在此基础上,通过对牦牛输卵管上皮细胞体外培养中加入不同浓度的EGF,运用qRT-PCR检测了Ovn、HIF-1α、Bcl-2和Bax mRNA的表达,从而探讨了EGF对牦牛输卵管上皮细胞分泌的调控作用。研究结果表明:(1)牦牛Ovn cDNA序列与黄牛(Bos taurus)和印度水牛(Bubalus bubalis)具有很高的同源性;氨基酸序列比对进化树表明,牦牛Ovn与黄牛的同源性最高,达到99.1%;成功克隆出牦牛Ovn的cDNA序列,GenBank登录号:KF303541。(2)卵泡期后期Ovn mRNA的表达最高,黄体期前期和黄体期后期表达依次减少,卵泡期前期阶段相对表达量最低;蛋白免疫标记在卵泡期后期和黄体期前期阶段较明显,其他阶段则减弱;壶腹部和伞部Ovn mRNA的表达差异不显著。(3)原代牦牛输卵管上皮细胞贴壁时间和生长比较慢,Ovn主要分布在细胞质中;90%FBS+10%DMSO的冻存效果优于传统方法。(4)牦牛输卵管上皮细胞体外培养中添加EGF可提高输卵管上皮细胞Ovn、HIF-1α和Bcl-2 mRNA的表达,降低Bax mRNA的表达,且其作用浓度具有剂量依赖性,最佳浓度为50 ng?m L-1。本研究得到了包含完整开放阅读框的牦牛Ovn的cDNA序列,明确了发情周期中不同阶段Ovn mRNA表达的差异性,并发现EGF可能是通过调控HIF-1α抑制输卵管上皮细胞的凋亡、促进Ovn分泌。研究结果为进一步揭示EGF在输卵管上皮细胞对卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用机制提供了理论依据,有助于牦牛胚胎体外发育技术改进。
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823.85

【参考文献】

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本文编号：1332917