亚硒酸钠对脱氧雪腐镰刀菌烯醇致体外培养猪脾脏淋巴细胞氧化损伤的保护作用研究

发布时间：2017-12-29 06:18

本文关键词：亚硒酸钠对脱氧雪腐镰刀菌烯醇致体外培养猪脾脏淋巴细胞氧化损伤的保护作用研究　出处：《四川农业大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：本研究通过体外原代培养猪脾脏淋巴细胞,单独/联合添加脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、亚硒酸钠(Na_2SeO_3),探讨Na_2SeO_3对DON致猪脾脏淋巴氧化损伤的保护作用。方法：(1)通过分别添加不同浓度DON (0.0625 μg/mL、0.125 μg/mL、0.25 μg/mL、 0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL、8 μg/mL、16 μg/mL、32 μg/mL)、 Na_2SeO_3 (0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L、 16 μmol/L),体外原代培养猪脾脏淋巴细胞48h后,采用CCK-8法检测细胞活力,计算DON致猪脾脏淋巴细胞IC50及Na_2SeO_3作用于猪脾脏淋巴细胞最适营养浓度。(2)正式试验分10组,分别为D1 (DON 824 ng/mL), D2 (DON412 ng/mL), D3(DON 206 ng/mL), D4(DON 103 ng/mL), S(Na_2SeO_32 μmol/L), SD1 (Na_2SeO_3 2 μmol/L+DON 824 ng/mL), SD2 (Na_2SeO_32 μmol/L+DON 412 ng/mL), SD3 (Na_2SeO_32 μmol/L+DON206ng/mL), SD4(Na_2SeO_32 μmol/L+DON 103ng/mL),对照组,于体外培养猪脾脏淋巴细胞6、12、24和48h后,分别检测细胞活力,细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,细胞总抗氧化能力(T-AOC)和抑制羟自由基能力,细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和过氧化氢(H2O2)含量。结果：(1)培养48h后,与对照组相比,除0.0625 μg/mL组外,其余各试验组均极显著降低猪脾脏淋巴细胞活力(P0.01),并得出DON致猪脾脏淋巴细胞IC50为0.82±0.35 μg/mL; Na_2SeO_3在0.25-4 μmol/L能够显著提高脾脏淋巴细胞活力(P0.01),其浓度提高到16 μmol/L时明显降低细胞活力(P0.01),并得出Na_2SeO_3最适营养浓度为2 μmol/L。(2)单独添加DON作用于猪脾脏淋巴细胞,与对照组相比,除D4组个别指标外,其余各组细胞上清液LDH活性,MDA和H202含量均明显升高(P0.05或P0.01)；细胞活力,GSH含量,GPx、SOD、CAT活性,T-AOC和抑制羟自由基能力均明显下降(P0.05或P0.01)。(3)单独添加Na_2SeO_3作用于猪脾脏淋巴细胞,与对照组相比,细胞活力、细胞GPx活性(12、24和48 h)、T-AOC和抑制羟自由基能力均明显提高(P0.05或P0.01),细胞H202含量(12和24 h)、MDA含量(24和48 h)均明显降低(P0.05或P0.01)。(4)联合添加DON和Na_2SeO_3作用于猪脾脏淋巴细胞,在整个试验期间,与单独添加DON组相比,联合添加DON和Na_2SeO_3组细胞活力、抗氧化酶(GPx、 SOD、CAT)活性、T-AOC、细胞抑制羟自由基能力、GSH含量均提高,细胞内MDA和H202含量、培养上清液LDH活性均下降。其中,在24 h时,与单独添加DON组相比,联合添加DON和Na_2SeO_3组细胞活力(SD3和SD4组)、GSH含量、GPx活性(SD1组除外)、SOD活性(SD3和SD4组)、CAT活性(SD3和SD4组)、T-AOC及抑制羟自由基能力(SD3组除外)均明显提高(P0.05或P0.01),细胞内H202和MDA含量及上清液LDH活性均明显下降(P0.05或P0.01)。结论：DON暴露能够导致猪脾脏淋巴细胞抗氧化功能降低,导致细胞活力下降。0.25-4 μmol/LNa_2SeO_3能够明显提高淋巴细胞活力,16 μmol/LNa_2SeO_3则对猪脾脏淋巴细胞产生毒性作用。在本试验条件下,2 μmol/L的Na_2SeO_3对DON诱导的猪脾脏淋巴细胞氧化损伤具有一定程度抑制作用,且在24 h时Na_2SeO_3对DON诱导猪脾脏淋巴细胞氧化损伤的抑制作用最佳。
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【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.8

【参考文献】