几种佐剂对猪O型FMDV重组多表位抗原免疫原性的影响
本文关键词：几种佐剂对猪O型FMDV重组多表位抗原免疫原性的影响 出处：《甘肃农业大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的急性、热性、高度接触性传染病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为发病必须报告的疫病,我国将其列为一类动物疫病。FMD曾经在世界多个国家和地区出现过大流行,严重威胁着畜牧业的发展。疫苗免疫是防控FMD的综合措施之一。近年来,表位疫苗的研究以及为表位疫苗选择高效的免疫佐剂成为了研究热点。我国流行的O型FMDV毒株包括O/HN/CHA/93、O/Mya/98和O/Tibet/CHA/99,严重危害着养猪业的发展。为了研制猪O型FMDV广谱多表位疫苗,本实验将编码3个毒株VP1蛋白135~160aa和200~213aa表位的基因进行串联,命名为RE。利用BamH I、EcoR I、HindⅢ、Xho I 4种限制性内切酶及其酶切位点,将合成的RE基因和猪Ig G重链恒定区基因依次克隆到pMD18-T载体构建重组质粒。利用相同的限制性内切酶,将克隆得到的2种基因导入原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pE-IgG。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达得到融合蛋白pE-IgG-672。对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析、纯化及Western blot鉴定。鉴定正确后,分别用5种免疫佐剂ISA206、ISA201、IMS1313、603、ISA61乳化融合蛋白,按照每头份0.5mL(含25μg重组抗原)的剂量配制成疫苗,背部多点注射免疫BALB/c雌鼠做免疫效力试验。通过间接ELISA方法测定抗体水平,并利用流式细胞术检测淋巴细胞亚群的分泌情况,比较几种佐剂的免疫功效,以便筛选出最适合于本疫苗的免疫佐剂。结果表明:重组蛋白pE-IgG-672以包涵体的形式表达,能与O型FMDV标准阳性血清发生特异性反应,具有很强的反应原性;通过间接ELISA和流式细胞术的检测结果分析,证实了5种佐剂中,ISA201佐剂和603佐剂在小鼠体内的佐剂效应优于其他佐剂,ISA201佐剂的优势更为明显。
[Abstract]:The recombinant plasmid pE - IgG - 672 was cloned into prokaryotic expression vector pET - 30a ( + ) . The recombinant plasmid pE - IgG - 672 was cloned into prokaryotic expression vector pET - 30a ( + ) .
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.4
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，本文编号：1389263
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