αMSH和MC5R拮抗剂调节3T3-L1脂肪细胞凋亡和炎症的机制

发布时间：2018-01-22 08:09

  本文关键词： αMSH MC5R拮抗剂 3T3-L1脂肪细胞 细胞凋亡 细胞炎症　出处：《西北农林科技大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：αMSH是由下丘脑分泌的一种神经内分泌激素,可调控MC5R受体分子的表达,进而介导脂肪细胞分化及脂代谢等诸多生理过程。研究表明,αMSH可通过MC5R抑制巨噬细胞、C2C12成肌细胞的凋亡,抑制细胞炎症因子的表达,由此推测αMSH可能对脂肪细胞凋亡和炎症有影响,但其具体作用机理仍不清楚。近年来对MC5R研究主要侧重在脂肪细胞分化和代谢调控等方面,并筛选了MC5R的特异性拮抗剂JNJ10229570,但MC5R在脂肪细胞凋亡和炎症方面的作用尚未见报道。本研究在构建棕榈酸诱导的细胞凋亡模型和脂多糖处理的炎症模型的基础上,探讨αMSH通过MC5R调控脂肪细胞凋亡和炎症的具体作用及其机制,其结果为进一步揭示MC5R在脂肪细胞中的作用机制以及通过MC5R防治肥胖等相关疾病提供理论依据。本试验获得如下结果:1.本试验证实一定浓度的αMSH对3T3-L1脂肪细胞无毒害作用,浓度为300nM、500 nM、700 nM和900 nM的αMSH使MC5R的mRNA表达水平显著提高(P0.05);0.8μM的MC5R特异性拮抗剂JNJ10229570能使MC5R表达水平显著降低(P0.05)。0.2mM的棕榈酸盐作用脂肪细胞24h后,细胞存活率达到78%,为细胞最佳处理时间。油红O和Bodipy染色的结果表明,在3T3-L1脂肪细胞中,αMSH可促进脂滴沉积;相反,MC5R拮抗剂可抑制脂肪细胞中脂滴的沉积。2.利用棕榈酸盐构建3T3-L1脂肪细胞凋亡模型,结合Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测,结果表明,αMSH显著减少细胞凋亡数量(P0.05),棕榈酸盐和αMSH共处理组细胞凋亡数介于单独的αMSH组和棕榈酸盐组之间(P0.05);而MC5R拮抗剂则与αMSH作用相反。RT-PCR和Western Blotting检测细胞凋亡相关基因发现,αMSH组中抑凋亡因子Bcl-2的表达量显著上升,促凋亡因子Bax的表达量显著下降,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3活性极显著降低(P0.05),单独的棕榈酸盐诱导组促凋亡因子Bax的表达量显著上升,抑凋亡因子Bcl-2的表达量显著下降,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3活性极显著增强(P0.05),棕榈酸和αMSH共处理组凋亡因子的表达水平则处于单独的αMSH组和棕榈酸盐组之间(P0.05);MC5R拮抗剂可显著增加棕榈酸盐诱导的凋亡因子Bax、cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3的表达水平(P0.05)。3.构建脂多糖处理的3T3-L1脂肪细胞炎症模型,在转录和翻译水平上检测炎症因子的变化情况。MTT检测细胞活率表明,LPS最佳处理浓度是1μg/mL。αMSH能够显著抑制IL-1β、IL-6和MCP-1的表达(P0.05);MC5R拮抗剂显著增加炎性因子IL-1β、IL-6和MCP-1的表达(P0.05),与空白对照组相比,二者对TNF-α的表达有作用,但差异不显著。4.对JNK信号通路的研究结果表明,αMSH抑制JNK磷酸化水平;MC5R拮抗剂可提高JNK磷酸化水平(P0.05)。加入JNK抑制剂(SP600125),JNK及其下游c-Jun磷酸化表达水平下降(P0.05)。以上结果表明:αMSH可通过MC5R抑制3T3-L1脂肪细胞凋亡,降低促炎性细胞因子表达水平;而MC5R拮抗剂能促进脂肪细胞凋亡和炎症反应;且JNK信号通路参与调控3T3-L1脂肪细胞凋亡和炎症。
[Abstract]:The results showed that 伪MSH could inhibit the apoptosis and inflammation of 3T3 - L1 adipocytes . The results showed that 伪MSH could inhibit the apoptosis and inflammation of 3T3 - L1 adipocytes . The levels of IL - 1尾 , IL - 6 and MCP - 1 in 3T3 - L1 adipocytes were significantly inhibited by MC5R antagonist ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.3

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本文编号：1454173