酵母双杂交系统筛选猪流行性腹泻病毒N蛋白互作的宿主蛋白

发布时间：2018-01-30 04:30

本文关键词： 猪流行性腹泻病毒酵母双杂交 N蛋白蛋白互作　出处：《中国预防兽医学报》2017年11期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为了获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白与宿主细胞中的互作蛋白,本研究构建PEDV N蛋白基因的重组载体p GBKT7-N,以其作为诱饵质粒,采用酵母双杂交方法,从猪肺泡巨噬细胞(PAM)cDNA文库中筛选出与N蛋白相互作用的蛋白。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中不存在毒性和自激活作用,而且筛选出6种与N蛋白互作的蛋白,分别为FTH1、LGALS3、CORO1C、SNRPG、KRTAP5-3和ZNF598。其中半乳糖凝集素3(LGALS3)和小核糖蛋白G(SNRPG)通过回返试验和免疫共沉淀试验证实其与PEDV的N蛋白存在特异性相互作用。本研究为进一步研究PEDVN蛋白的功能及病毒的致病机制奠定了基础。
[Abstract]:In order to obtain the interaction protein between PEDVN protein and host cells of porcine epidemic diarrhea virus, the recombinant vector p GBKT7-N of PEDV N protein gene was constructed in this study. The protein interacting with N protein was isolated from porcine alveolar macrophage (Pam) cDNA library by yeast two-hybrid method. The bait protein had no toxicity and self-activation in yeast two-hybrid system, and the six proteins interacting with N protein were identified as FTH1GALS3CORO1CnSNRPG. KRTAP5-3 and ZNF598. among them, galactose agglutinin 3 (LGALS3) and small nuclear glycoprotein (GSNRPG). The results of return test and immunoprecipitation test showed that there was a specific interaction between PEDVN protein and the N protein of PEDV. This study laid a foundation for further study on the function of PEDVN protein and the pathogenesis of the virus.
【作者单位】：河南科技大学;中国农业科学院上海兽医研究所;
【基金】：国家自然科学基金(31201915;31502071) 上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2013)第3-6号,第5-5号]
【分类号】：S852.651
【正文快照】： *Corresponding author猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由PEDV感染引起的一种急性接触性肠道传染病,该病在临床上主要特征为腹泻、呕吐、脱水和对7日龄以内的哺乳仔猪高致死率(100%)。自2010年以来,以变异PEDV为主要病原体的仔猪腹泻在我国爆发,并迅速席卷全国

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