猪繁殖与呼吸综合征病毒GDr180疫苗株与其他毒株PCR-HRM鉴别检测方法的建立

发布时间：2018-02-09 10:28

  本文关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 不对称PCR HRM　出处：《中国兽医科学》2017年12期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为建立一种快速鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗株GDr180株与其他毒株的PCR-HRM检测方法,比对NCBI登录的PRRSV全基因序列,筛选GDr180株与其他株的差异位点。PCR反应体系在加入LC Green染料及3′端封闭的探针下进行不对称PCR扩增,在HRM功能模式下进行PCR产物的熔解曲线分析。结果显示,GDr180株PCR产物的熔解曲线探针峰Tm值为72.64±0.39℃,而PRRSV其他株的探针峰Tm值为65.63±0.69℃或无探针峰,两者差异极显著。用本方法引物扩增非PRRSV如猪流行性腹泻病毒(PEDV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒(PCV)和猪轮状病毒(Po RV)无特异性目的条带,标准品检测灵敏度为1 000 copies/L。本研究建立的PCR-HRM是一种高通量、经济、简便和可靠的用于鉴别PRRSV GDr180株与其他毒株的方法。
[Abstract]:In order to establish a PCR-HRM method for rapid identification of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSVV) vaccine strains from other strains, the whole PRRSV gene sequence registered by NCBI was compared. Screening the difference sites between GDr180 strain and other strains. PCR reaction system was amplified by asymmetric PCR with LC Green dye and 3 'closed probe. The melting curves of PCR products were analyzed in HRM functional mode. The results showed that the probe peak TM value of PCR products was 72.64 卤0.39 鈩，

本文编号：1497719