猪白细胞介素18基因的克隆及真核表达重组质粒的构建

发布时间：2018-02-14 23:05

  本文关键词： 猪 IL-基因 真核表达载体 克隆　出处：《中国畜牧兽医》2017年09期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为获得表达猪白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的真核表达重组质粒,试验通过RT-PCR从猪脾脏、肺脏和淋巴结组织中扩增猪IL-18全基因并定向克隆到真核表达载体pZJ-1,测序分析和酶切鉴定正确后,转染至293T细胞中,并通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别在基因和蛋白水平检测IL-18的表达。结果表明,试验成功构建了真核表达重组质粒pZJ-IL-18,且可以在293T细胞中表达IL-18基因。Western blotting试验证实,猪IL-18多克隆抗体能与约17ku的表达产物发生特异性反应,表明IL-18能正确表达且具有反应原性。本试验构建了表达猪IL-18基因的真核表达质粒,并在293T细胞中瞬时表达,为进一步研究IL-18的功能奠定基础。
[Abstract]:In order to obtain the eukaryotic expression plasmid of porcine interleukin-18 interleukin-18hIL-18, porcine IL-18 gene was amplified from pig spleen, lung and lymph nodes by RT-PCR and cloned into eukaryotic expression vector pZJ-1.After sequencing and restriction endonuclease digestion, the recombinant plasmid pZJ-1 was cloned into the eukaryotic expression vector pZJ-1. Transfection into 293T cells and detection of IL-18 expression at gene and protein levels by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. The eukaryotic expression plasmid pZJ-IL-18 was successfully constructed, and the IL-18 gene was expressed in 293T cells. Western blotting assay confirmed that porcine IL-18 polyclonal antibody could react specifically with about 17 ku expression product. The eukaryotic expression plasmid expressing porcine IL-18 gene was constructed and expressed in 293T cells, which laid a foundation for further study on the function of IL-18.
【作者单位】： 河南农业大学牧医工程学院;
【基金】：国家自然科学基金(31272567、31772781) 河南省高校科技创新人才支持计划(14HASTIT022)
【分类号】：S858.28

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李雪梅,赵春丽;人肝再生增强因子基因的克隆和真核表达载体的构建[J];河北农业大学学报;2005年05期

2 杨娜娜;朱靖;孟春花;杜立新;;小鼠白血病抑制因子真核表达载体的构建及测序分析[J];家畜生态学报;2006年01期

3 王光川;巴彩凤;苏荣健;张轶博;赵微;宋慧娟;武洁;;犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达[J];安徽农业科学;2008年31期

4 章世元;俞路;王雅倩;李燕舞;李治学;严桂芹;周联高;;真核表达载体pCDNA3-CaBP-D28k的构建及细胞表达[J];西北农业学报;2008年05期

5 余露露;潘春留;关伟军;卿素珠;;人溶菌酶基因的克隆及其真核表达载体的构建[J];动物医学进展;2009年04期

6 黄仙仙;徐婷婷;徐雪丽;赵卫东;郑振宇;李春丽;;人β-防御素3基因的克隆分析及其真核表达载体的构建[J];中国农学通报;2012年05期

7 张瑜;马凤龙;刘焕珍;乔彦良;赵玉军;;牛乳素真核表达载体的构建[J];湖北农业科学;2008年05期

8 王小玉;林华;郭万柱;徐志文;王印;朱玲;;猪前胸腺素真核表达载体的构建及表达[J];西南农业学报;2010年04期

9 付通超;万红平;程渝;颜其贵;;猪流行性腹泻病毒E基因真核表达载体的构建与鉴定[J];畜牧兽医杂志;2012年04期

10 张腾业;王珍珍;陈仁金;袁红花;胡安康;吴连连;朱裕华;冀德君;朱孝荣;;血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建[J];家畜生态学报;2014年06期

相关会议论文 前10条

1 周仪华;王耀晟;何力鹏;鲍晓明;黄晓;程晓曙;;可溶性血管内皮细胞生长因子受体1真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年

2 王怀鹏;蒲小勇;王行环;单志新;高炜城;杨中华;李世林;罗耀雄;徐战平;;巨噬细胞移动抑制因子基因真核表达载体的构建和鉴定[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

3 邱明链;;真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL的构建及鉴定[A];2012中国器官移植大会论文汇编[C];2012年

4 程蓓;叶大风;谢幸;陈怀增;吕卫国;;人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 吴涓涓;章晓联;;反义葡萄糖苷酶Ⅰ和分子伴侣钙联蛋白基因真核表达载体的构建[A];湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议论文集[C];2003年

6 承海;糜漫天;张乾勇;;ω-3脂肪酸依赖的跨膜型TNFα真核表达载体的构建及抗癌效应研究[A];中国营养学会第九次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2004年

7 田晓滨;孙立;杨述华;;克隆并构建人骨形成蛋白-2真核表达载体[A];2006年贵州省医学会骨科学分会学术年会论文汇编[C];2006年

8 张灿;鞠吉雨;冯永堂;李在连;;乙肝病毒反义X基因真核表达载体的构建[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年

9 林英;郑建秋;刘平;葛红岩;侯丽丽;吕锋;金迪;马洪梅;付晓玻;;缝隙连接蛋白50真核表达载体的构建与表达[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

10 李刚;王平;;人膀胱逼尿肌中肾上腺素能β_2受体基因的克隆及反义真核表达载体的构建[A];全面建设小康社会：中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集（下）[C];2003年

相关重要报纸文章 前2条

1 张中桥;可诱导性真核表达载体构建成功[N];中国医药报;2004年

2 ;1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达[N];中国医药报;2003年

相关博士学位论文 前4条

1 张守纯;p16真核表达载体的构建及其转基因的研究[D];中国医科大学;2004年

2 王小芳;重组肾上腺髓质素真核表达载体的构建及实验研究[D];复旦大学;2004年

3 张越;SLC34A2基因真核表达载体的构建及其转染人肺泡上皮细胞的实验研究[D];吉林大学;2008年

4 杜德伟;丙型肝炎病毒的受体研究——B族Ⅰ型清道夫受体介导HCV入胞作用的研究[D];第四军医大学;2004年

相关硕士学位论文 前10条

1 廖新华;Neuritin转基因小鼠的构建与鉴定[D];石河子大学;2015年

2 m景军;传染性法氏囊病病毒VP4和VP5蛋白基因真核表达载体的构建、表达及对Ⅰ型干扰素信号通路的影响[D];南京农业大学;2014年

3 姜晨霞;mInsB_(15-23)H-2K~d-SCT真核表达载体对NOD小鼠T淋巴细胞亚群的影响[D];扬州大学;2015年

4 饶小惠;嵌合PXR表达载体的构建及对CYP3A4表达的影响[D];南方医科大学;2013年

5 李婷;重组人甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19的表达与初步鉴定[D];河北北方学院;2016年

6 崔运福;靶向Survivin基因miRNA真核表达载体的构建及对人结肠癌细胞增殖的影响[D];滨州医学院;2015年

7 徐洪龙;人LL-37基因真核表达载体的构建及在细胞中的表达与鉴定[D];甘肃农业大学;2016年

8 辛莉;CRMP-1-phrGFP II-N真核表达载体的构建及其对突起生长的调节[D];暨南大学;2007年

9 吕婷婷;pHsa-miR16-shRNA真核表达载体的构建、体外转录及其活性的鉴定[D];华中科技大学;2009年

10 王艳芳;慢性粒细胞白血病bcr/abl cDNA克隆及真核表达载体的构建[D];山西医科大学;2006年

，

本文编号：1511834