鉴别猪流行性腹泻病毒野毒株与疫苗株双重RT-PCR检测方法的建立

发布时间：2018-02-15 14:28

  本文关键词： 猪流行性腹泻病毒 野毒株 疫苗株 双重PCR　出处：《中国预防兽医学报》2017年05期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为建立鉴别猪流行性腹泻病毒野毒株与疫苗株的检测方法,本研究根据GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M、ORF3基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PEDV野毒株和疫苗株的双重RT-PCR检测方法。特异性试验显示,该检测方法对猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、Salmonella及E.coli等结果均为阴性;敏感性试验显示,所建立的双重PCR检测方法对M基因和ORF3基因的最低有效检测量分别为44.5拷贝/μL和481拷贝/μL。本研究建立的双重RT-PCR检测方法可实现对PEDV野毒和疫苗毒的快速检测,适合于现地猪流行性腹泻的鉴别诊断。
[Abstract]:In order to establish a method for the identification of wild and vaccine strains of porcine epidemic diarrhea virus, two pairs of specific primers were designed and synthesized according to the sequence of PEDVV MORF3 gene registered in GenBank, and the conditions of PCR amplification were optimized. A double RT-PCR detection method was established for the identification of PEDV wild strain and vaccine strain. The specificity test showed that the detection method was negative for porcine circovirus type 2, porcine pseudorabies virus, porcine parvovirus Salmonella and E. coli, and the sensitivity test showed that the detection method was negative for porcine circovirus type 2, porcine pseudorabies virus, porcine parvovirus and E. coli. The minimum effective detection of M gene and ORF3 gene was 44. 5 copies / 渭 L and 48 1 copies / 渭 L, respectively. The double RT-PCR detection method established in this study could be used to detect PEDV wild virus and vaccine virus quickly. It is suitable for differential diagnosis of epidemic diarrhea in pigs.
【作者单位】： 河南农业大学牧医工程学院;郑州市猪重大疫病防控重点实验室;
【基金】：河南省产学研合作项目(132107000002、152107000003)
【分类号】：S858.28

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