猪EP1基因的克隆与原核表达
本文关键词： 猪EP基因 非酶连接 丙酸诱导 原核表达 出处：《中国兽医学报》2017年05期 论文类型：期刊论文
【摘要】：为进一步体外研究EP1基因的生物学功能,本试验对EP1基因进行了组织分布分析。以猪骨髓cDNA为模板克隆了猪EP1基因的开放阅读框,对克隆的基因序列进行了序列分析,用非酶连接技术将此基因克隆至丙酸诱导型原核表达载体pBbB3a-His6-MBP-LIC中。用菌液PCR进行阳性克隆鉴定并测序,将测序鉴定正确的克隆菌液提取质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中。丙酸钠诱导表达His6-MBP-EP1融合蛋白,并用Western blot进行鉴定。结果显示:本试验成功克隆了猪EP1基因,长度为651bp,猪EP1基因在骨髓中的表达量很高;构建了EP1丙酸诱导型原核表达载体pBbB3a-His6-MBP-EP1;His6-MBP-EP1融合蛋白在裂解菌液的上清中表达,相对分子质量为65560。结果表明,运用大肠杆菌表达系统成功表达EP1基因融合蛋白,为进一步在体外开展猪EP1基因生物学功能的研究提供基础。
[Abstract]:In order to further study the biological function of EP1 gene in vitro , an open reading frame of EP1 gene was cloned from pig bone marrow cDNA . The cloned gene was cloned into E . coli BL21 ( DE3 ) . The expression of His6 - MBP - EP1 fusion protein was cloned into E . coli BL21 ( DE3 ) . The results showed that the EP1 gene was successfully cloned into E . coli BL21 ( DE3 ) .
【作者单位】： 河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室;
【基金】：农业部“948”重点计划资助项目(2011-G35) 河南省重点科技攻关资助项目(112102310705)
【分类号】：Q78
【参考文献】
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【共引文献】
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【二级参考文献】
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本文编号：1538926
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