鸡传染性贫血病毒Nested-PCR检测方法的建立以及不同CIAV母源抗体水平对鸡群保护率的影响

发布时间：2018-03-08 04:12

本文选题：CIAV　切入点：弱毒疫苗　出处：《山东农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：鸡传染性贫血病是一种由鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anaemia virus,CIAV)引起的一种临床上以贫血、骨髓黄染、全身淋巴组织萎缩和免疫机能损害为主要特征的传染病。在全球很多地方已经普遍出现了感染CIAV的家禽,给鸡群造成了极大地危害。除了垂直传播和水平传播外,使用了被CIAV污染的弱毒疫苗是其另一重要的传播途径之一,而通常其中污染的CIAV剂量较低,需要使用灵敏特异而又快速简便的方法来检测。除综合性生物安全措施外,通过多种途径使雏鸡获得一定水平的母源抗体对于阻止CIAV的感染具有重要意义。本研究建立了针对CIAV的Nested-PCR方法用于弱毒疫苗中CIAV污染的检测并与其它方法开展了对比,此外对不同滴度的母源抗体阻止CIAV感染和致病中的作用做了系统分析。1.鸡传染性贫血病毒Nested-PCR检测方法的建立及应用疫苗中污染CIAV是造成CIAV感染的途径之一,因此加强对禽弱毒疫苗中CIAV污染的监测对于种禽场防控CIAV极其重要,而通常疫苗中CIAV污染剂量较低,应用一般的技术难以检测到。为了检测禽弱毒疫苗中CIAV的污染,本研究根据GenBank已发表的CIAV基因序列,针对其保守区设计了外用引物和内用引物,通过优化反应体系和反应条件建立了检测CIAV的Nested-PCR检测方法。结果显示,建立的检测方法灵敏度高,比常规PCR灵敏度高100倍。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及鸡马立克氏病毒等病毒基因均无交叉反应,具有很好的特异性。在模拟试验中,该方法可以检测到1000羽份弱毒疫苗中1个EID50的低剂量污染,应用该方法从企业送检的125批次的疫苗样品共检测出6个CIAV阳性样品,从45份病料中共检测出23个CIAV阳性性品,这与荧光定量PCR检测以及PCR结合核酸斑点杂交检测法检测结果基本一致,可以作为这两种方法的补充或替代,为不同实验条件和技术水平的企业提供了更多实用性的选择。2.不同CIAV母源抗体水平对鸡群保护率的影响由于CIAV的感染在国内较为普遍,种鸡场大日龄鸡的抗体阳性率较高,因此就可能通过垂直传播使雏鸡从母鸡体内获得一定滴度的CIAV母源抗体,而母源抗体可以在一定程度上保护雏鸡免受CIAV的感染,但是对于何种抗体水平可以抵抗多少病毒量的感染从未有任何观察数据。本研究通过人工模拟试验模拟了不同CIAV母源抗体水平对鸡群保护率的影响。通过对不同母源抗体滴度的1日龄海兰褐雏鸡分别按照150 EID50、700 EID50、1500 EID50剂量进行攻毒,观察其每周的体重、红细胞数目的变化情况,每周采集抗凝血后提取DNA检测CIAV核酸,采集促凝血分离血清检测CIAV抗体变化。结果显示,对于母源抗体水平较高(15000)的鸡来说,攻毒150 EID50后,体重变化和红细胞数目较正常鸡差异不显著,血液中未检测出CIAV核酸。CIAV抗体随着日龄增长呈现下降状态,在六周内检测CIAV抗体均为阳性,免疫器官指数与正常鸡相比差异不显著。攻毒700 EID50后,体重有轻微减轻的趋势,红细胞数目在前四周出现明显下降趋势,只有个别鸡血液检测出现了CIAV核酸阳性,CIAV抗体滴度随着日龄增长呈下降趋势,在第6周左右接近抗体阳性临界点,免疫器官指数与正常鸡相比出现了差异。攻毒1500 EID50后,体重下降趋势明显,红细胞数目在前四周急剧下降,部分鸡只出现了CIAV核酸阳性,CIAV抗体滴度在第5周下降为阴性。对于母源抗体水平较低(7000)组的鸡来说,在各项指标的检测中相比于母源抗体水平较高的鸡差异更为显著,且高剂量攻毒出现大量死鸡。上述结果证明了高水平的母源抗体滴度可以在一定程度上保护雏鸡免受低毒量的CIAV的感染,但是一旦感染剂量超过一定程度仍然能突破母源抗体的保护使鸡体感染CIAV。
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【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.31

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