Nesfatin-1在雄性大鼠生殖轴上的表达与作用

发布时间：2018-03-21 02:40

  本文选题：Nesfatin-1/NUCB2　切入点：生殖轴　出处：《安徽农业大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:探讨Nesfatin-1/NUCB2在雄性大鼠下丘脑-垂体-睾丸轴上的表达和作用。分析Nesfatin-1/NUCB2蛋白及其mRNA在不同发育阶段雄性大鼠生殖轴和血清中的表达变化。结合外源性Nesfatin-1/NUCB2对促性腺激素、性腺激素的分泌及其相关基因表达的影响以及对体外培养睾丸间质细胞分泌睾酮及其合成相关基因的影响。在组织学、内分泌学、细胞和分子水平阐明Nesfatin-1/NUCB2在雄性大鼠生殖轴的表达及其作用制。方法:(1)10d,25d,45d雄性大鼠心脏灌注后取下丘脑、垂体和睾丸,经过4%多聚甲醛固定后,制做石蜡切片,采用免疫荧光法观察Nesfatin-1/NUCB2的定位,并用形态学分析软件统计平均荧光强度。(2)取不同发育阶段(10d,25d,45d,65d)雄性SD大鼠血液、下丘脑、垂体和睾丸,分别采用实时荧光定量PCR法(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和酶联免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析Nesfatin-1/NUCB2 mRNA在下丘脑、垂体和睾丸上的表达及血清中Nesfatin-1浓度的变化。(3)45d,65d雄性大鼠麻醉后固定于脑立体定位仪,试验组和对照组分别侧脑室注射10μL的Nesfatin-1/NUCB2(含50 ng)和生理盐水,60 min后断头处死,取血液、下丘脑、垂体和睾丸,ELISA检测血清中促黄体素(luteinizing hormone,LH)、促卵泡素(follicle-stimulate hormone,FSH)和睾酮(Testosterone,T)的浓度;qRT-PCR检测下丘脑GnRH和Kiss-1、垂体FSHβ和LHβ、睾丸3β-HSD、17β-HSD、P450scc和StAR mRNAs的表达水平。(4)45d雄性大鼠断头处死,收集睾丸间质细胞进行体外培养,单独添加不同剂量的Nesfatin-1/NUCB2以及共添加Nesfatin-1/NUCB2和hCG,48h后收集培养液和细胞,ELISA测培养液中T的浓度,qRT-PCR分析细胞中3β-HSD、17β-HSD、P450scc和StAR mRNA的表达水平。结果:(1)Nesfatin-1/NUCB2在10d,25d,45d雄性大鼠的正中隆起、室旁核、弓状核、室周核、视上核、下丘脑外侧区,腺垂体以及睾丸间质细胞上均有分布。但在45d大鼠下丘脑正中隆起和弓状核,免疫荧光强度显著高于10d和25d(P0.05);在10d大鼠的室旁核、室周核和下丘脑外侧区,免疫荧光强度显著低于25d和45d(P0.05),而25d和45d则差异不显著(P0.05);在下丘脑视上核、腺垂体和睾丸间质细胞,免疫荧光强度随年龄增加(从10d到45d)呈现逐渐上升的趋势(P0.05)。(2)Nesfatin-1/NUCB2 mRNA在10d,25d,45d,65d的雄性大鼠下丘脑、垂体、睾丸中均有表达;在下丘脑,45d大鼠Nesfatin-1/NUCB2mRNA表达水平显著低于10d(P0.05);在垂体和睾丸,45d和65d的表达水平显著高于10d和25d(P0.05)。大鼠血清中Nesfatin-1/NUCB2的浓度在25d显著低于10d、45d和65d(P0.05)。(3)侧脑室注射Nesfatin-1/NUCB2显著降低雄性大鼠血清中FSH、LH和T的含量(P0.05);下丘脑的GnRH、Kiss-1、垂体FSHβ、LHβ和睾丸StAR mRNAs的水平都显著低于对照组(P0.05);Nesfatin-1显著提高65d但降低45d大鼠睾丸3β-HSD、17β-HSD、P450scc mRNAs的表达(P0.05)。(4)在体外,1ng/ml Nesfatin-1/NUCB2显著提高睾丸间质细胞T的分泌和GnRH、Kiss-1、FSHβ、LHβ3β-HSD、17β-HSD、P450scc、StAR mRNAs的表达(P0.05)。结论:(1)Nesfatin-1/NUCB2蛋白及其mRNA广泛存在于雄性大鼠下丘脑、垂体和睾丸,但其表达水平随年龄不同而有差异。(2)Nesfatin-1在25d大鼠血清中浓度最低。(3)Nesfatin-1/NUCB2在中枢水平抑制45d和65d雄性大鼠促性腺激素和睾酮的分泌以及下丘脑的GnRH、Kiss-1、垂体FSHβ、LHβ和睾丸StAR mRNAs的表达。(4)在体外,1ng/ml Nesfatin-1/NUCB2促进睾丸间质细胞T的分泌以及T合成相关基因的表达。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S814.1

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