不同产蛋期豁眼鹅下丘脑组织差异蛋白的筛选及原核表达

发布时间：2018-03-21 06:22

  本文选题：差异表达蛋白　切入点：下丘脑　出处：《沈阳农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：近几年来,我国养鹅业逐渐向规模化、集约化、现代化方向发展,其屠宰量、饲养量均处于世界首位。但种鹅繁殖效率低,整体生产性能低,制约着我国养鹅业的发展,然而,豁眼鹅作为我国优良的高产地方品种,其产蛋性能居世界鹅种前列,有"鹅中国宝"之美誉,是用于科研研究和种鹅培育的理想鹅种。辽宁豁眼鹅,具有较高的产蛋量,较强的繁殖性能、抗粗饲性、抗寒性等良好性状。近年来,随着引进种鹅数量的增加,以及与其他种鹅杂交范围的扩大化,导致豁眼鹅自身优良种质特性发生蜕化,特别在高产蛋、高繁殖方面,导致其饲养经济效益的下降。因此,利用分子生物学方法筛选以及鉴定其产蛋性能相关的功能蛋白,进而挖掘调控产蛋性能的主效基因,进而通过分子育种以提高其产蛋性能显得非常重要。本研究以辽宁豁眼鹅为研究对象,首先通过同位素标记相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术筛选产蛋前和产蛋期下丘脑组织差异表达蛋白,应用生物信息学工具对表达差异极显著或显著的蛋白进行功能分析,然后通过Western Blotting技术检测产蛋前和产蛋期两个阶段豁眼鹅下丘脑组织中Complexin 1和EAAT2蛋白的表达量变化情况,接着构建了Complexin 1和EAAT2的原核表达载体,进行原核表达水平的检测。试验结果如下:(1)筛选出34个差异显著或极显著的差异表达蛋白,其中18个上调表达,16个下调表达,这些蛋白主要影响促性腺激素释放激素、类固醇类激素、孕激素的合成等生理过程。(2)在豁眼鹅下丘脑组织检测到Complexin 1和EAAT2蛋白,其蛋白分子量分别为15kDa和60kDa。产蛋前到产蛋期,Complexin 1和EAAT2的蛋白表达量呈上升趋势,并且产蛋期的表达量极显著高于产蛋前。(3)成功获得豁眼鹅Complexin 1和EAAT2两个基因的ORF编码区,片段大小分别为399 bp和500 bp。(4)成功构建出克隆载体pMD-18T-Complexin 1和pMD-18T-EAAT2,以及蛋白原核表达载体pET28a-Complexin 1和pET28a-EAAT2,并且成功在大肠杆菌中表达出Complexin 1蛋白和EAAT2蛋白。由本研究可知,经iTRAQ技术和Western Blotting技术等成功鉴定出差异蛋白Complexin 1和EAAT2,其蛋白表达水平与产蛋性能有一定相关性,其中产蛋期Complexin 1和EAAT2两种蛋白上调,此结果将为进一步探讨豁眼鹅的分子选育工作奠定基础。
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【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S835
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本文编号：1642634