稳定表达携带SFB标签的猪圆环病毒2型Cap蛋白细胞株的构建及其凋亡活性检测

发布时间：2018-03-21 17:43

  本文选题：猪圆环病毒型　切入点：ORF基因　出处：《中国预防兽医学报》2017年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为建立稳定表达携带SFB标签的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的细胞株并研究其诱导凋亡活性,本研究利用Gateway系统构建真核表达载体p DEST-SFB-ORF2,转染PK15细胞,嘌呤霉素抗性筛选,western blot和免疫共沉淀试验鉴定,获得2株稳定表达携带SFB标签的Cap蛋白的PK15细胞株。间接免疫荧光检测发现重组Cap蛋白在部分细胞内呈点状荧光分布,可能形成病毒性颗粒;流式细胞仪检测表明Cap蛋白的表达可诱导PK15细胞凋亡。本研究成功表达携带SFB标签的PCV2 Cap蛋白,并验证了其诱导凋亡活性,同时为下一步通过串联亲合纯化/质谱方法鉴定Cap蛋白的互作蛋白研究奠定基础。
[Abstract]:In order to establish a stable cell line expressing porcine circovirus type 2 PCV2Cap protein carrying SFB label and to study its apoptosis-inducing activity, the eukaryotic expression vector pDEST-SFB-ORF2 was constructed by Gateway system and transfected into PK15 cells. Two strains of PK15 cells stably expressing Cap protein carrying SFB label were obtained by Western blot and immunoprecipitation assay. Indirect immunofluorescence assay showed that the recombinant Cap protein was dotted in some cells. The expression of Cap protein can induce apoptosis of PK15 cells. In this study, we successfully expressed the PCV2 Cap protein carrying SFB tag, and verified its apoptotic activity. It also lays a foundation for the further identification of Cap protein by tandem affinity purification / mass spectrometry.
【作者单位】： 浙江理工大学生命科学学院;
【基金】：国家自然科学基金(31101831) 浙江省自然科学基金(LY15C010006) 浙江理工大学521人才培养计划
【分类号】：S852.651

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本文编号：1644895