甲型鸭肝炎病毒的分离鉴定及致病性研究

发布时间：2018-03-24 03:18

  本文选题：Ⅰ型鸭肝炎病毒　切入点：分离鉴定　出处：《山东农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：鸭甲型病毒性肝炎是由甲型鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus A,DHAV)引起的一种急性和高度接触性传染病,给我国乃至世界的养鸭业造成了巨大的经济损失。其病原有三个血清型,Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。2008年,基于VP1、VP0、VP3基因序列及3D基因的部分序列将DHV-Ⅰ分A、B、C三个基因型,分别对应血清Ⅰ型、台湾新型和韩国新型。小RNA病毒科研究小组建议在小RNA病毒科中增设禽肝炎病毒属鸭甲型肝炎病毒种,并将血清型DHV-Ⅰ的3个基因型归属其中。本文将延用2008年后的分类,将引起鸭甲型病毒性肝炎的病毒归属于小RNA病毒科的禽肝炎病毒属鸭甲型肝炎病毒种,称之为鸭甲型肝炎病毒(DHAV),鸭甲型肝炎病毒又被分为三个基因型即A、B、C三个基因型。根据GenBank中DHAV的全基因序列,设计了目的片段大小为699bp的特异性引物,用RT-PCR检测方法对实验室收集的疑似鸭甲病毒性肝炎病例的病料进行了鉴定,鉴定结果显示病料中含有DHAV-A,再通过鸭胚终点方法纯化分离得到8株病毒。为获得全基因组,设计了9对特异性引物,然后将获得的目的基因送测序,用DNASTRA中的Seqman拼接,得到8株病毒的全基因组序列。遗传进化分析发现,这8个毒株与DHAV-A的同源性为93.1%-99.6%,与台湾变异株和韩国变异株之间的同源性在71.4%-72.2%,确定8株毒均为DHAV-A。基于基因进化分析,又分析了6个分离毒株对雏鸭的致病性。感染雏鸭后72h每组放血处死3只,并采集心、肝、脾、肺、肾、肠、胰腺、脑等器官组织,采用鸭胚滴定法进行病毒滴定。研究结果表明在各个组织中均有病毒存在,其中在肝脏中的含量最高,在免疫器官中的含量也相对较高,并确定鸭肝炎病毒在体内的分布情况为肝脏脾脏法氏囊肠心脏脑胰腺。实验结果还显示各毒株的致病能力有一定的差异性,毒株DHAV-15-2、DHAV-4和DHAV-40实验组的病毒滴定明显高于其他3组。得到结论证明本研究分离纯化了8株DHAV-A,并完成了全基因组的测序,证实了不同的DHAV-A对雏鸭有不同的致病性。
[Abstract]:Duck viral hepatitis A is an acute and highly contact infectious disease caused by duck hepatitis A virus (Duck Hepatitis Virus Agna DHAV), which has caused enormous economic losses to duck raising in China and the world. In 2008, based on VP1VP0VP3 gene sequence and 3D gene partial sequence, DHV- 鈪，

本文编号：1656477