猪链球菌2型转录调控因子Rex原核表达及体外结合活性分析

发布时间：2018-03-25 23:02

  本文选题：猪链球菌　切入点：Rex　出处：《中国人兽共患病学报》2017年08期

【摘要】：目的克隆猪链球菌2型转录调控因子Rex的编码基因进行原核表达和纯化,对其进行生物信息学分析和体外结合活性测定。方法 PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1的Rex基因编码区,将其克隆入pET28a质粒中,再将pET28aRex重组质粒转入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)中,重组菌株经IPTG诱导后能表达出猪链球菌Rex蛋白;通过体外凝胶迁移实验(EMSA)对Rex蛋白与DNA的结合活性进行分析。结果成功地原核表达并纯化了Rex重组蛋白。Rex蛋白与自身启动子Prex特异性结合,高浓度的NADH抑制两者的结合活性,而NAD~+对结合没有影响。结论通过体外结合试验发现Rex是通过响应NADH/NAD~+平衡来调控自身基因的表达。
[Abstract]:Objective to clone the encoding gene of Streptococcus suis type 2 transcription regulator Rex for prokaryotic expression and purification. Methods the coding region of Rex gene of Streptococcus suis type 2 strain SS2-1 was amplified by PCR for bioinformatics analysis and in vitro binding assay. The recombinant plasmid was cloned into pET28a plasmid and then transferred into E. coli expression strain BL21DE3. The recombinant strain was induced by IPTG to express Rex protein of Streptococcus suis. The binding activity of Rex protein to DNA was analyzed by in vitro gel migration assay. Results the recombinant Rex protein. Rex protein was successfully expressed and purified to bind to its own promoter Prex. High concentration of NADH inhibited their binding activity. Conclusion the in vitro binding assay shows that Rex regulates the expression of its own genes by responding to the NADH / NAD- equilibrium.
【作者单位】： 江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室;南京农业大学动物医学院;江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地;
【基金】：国家转基因生物新品种培育重大专项子课题(No.2014ZX0800946B-002) 国家公益性行业科研专项(No.201303041)~~
【分类号】：S852.611

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本文编号：1665242