猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒和轮状病毒多重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

发布时间：2018-03-26 02:01

  本文选题：传染性胃肠炎病毒(TGEV)　切入点：猪流行性腹泻病毒(PEDV)　出处：《黑龙江畜牧兽医》2017年15期

【摘要】：为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针,优化反应条件,开展特异性、敏感性、重复性和验证试验。结果表明:该方法的检测最低限为1×10~2拷贝/μL的RNA标准品或1×10~(-2)TCID_(50)/mL的疫苗毒,具有较高的敏感性;变异系数均小于10%,符合统计学要求;利用本试验所建立的方法以及商品化试剂盒对20份临床样品进行检测,符合率为100%。说明本试验建立的方法特异性好,敏感性高,重复性稳定,可用于PEDV、TGEV和RV的鉴别诊断和防控。
[Abstract]:In order to establish a multiplex real-time quantitative PCR method for simultaneous detection of porcine epidemic diarrhea virus (PEDVV), transmissible gastroenteritis virus (TGEV) and rotavirus (RV), the whole gene sequence of PEDV CV777 strain TGEV Purdue P115 and the VP6 gene sequence of RV OSU strain were studied. Three pairs of specific primers and probes were designed to optimize the reaction conditions, to carry out specificity, sensitivity, repeatability and verification tests. The results showed that the detection limit of this method was 1 脳 10 ~ 2 copy / 渭 L RNA standard or 1 脳 10~(-2)TCID_(50)/mL vaccine. It has high sensitivity, the coefficient of variation is less than 10, which conforms to the statistical requirements. 20 clinical samples were detected by using the method established in this experiment and commercial kit, the coincidence rate was 100. The result shows that the method established in this experiment has good specificity. The sensitivity is high and the repeatability is stable. It can be used in the differential diagnosis and prevention and control of PEDVV TGEV and RV.
【作者单位】： 北京三元集团畜牧兽医总站;
【分类号】：S852.651

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本文编号：1665838