猪传染性胃肠炎病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验原位检测方法的建立

发布时间：2018-03-27 05:34

  本文选题：猪传染性胃肠炎病毒　切入点：N蛋白　出处：《中国预防兽医学报》2017年03期

【摘要】：为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为0.5 ng/μL,二抗的最佳稀释倍数为1∶2 000倍,经AEC显色,TGEV感染的阳性细胞呈红棕色;对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好特异性;同时该方法能够在普通显微镜下观察到病毒在细胞中的分布情况。本研究建立的方法为TGEV的实验室鉴定及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供有效的检测手段。
[Abstract]:In order to establish an in situ detection method for porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV), the monoclonal antibody against TGEV N protein was used as the first antibody and the goat anti mouse IgG-HRP as the second antibody to AEC peroxidase substrate as the chromogenic fluid. A method for the detection of TGEV by immunoperoxidase monolayer assay was established. The results showed that the best concentration of the first antibody was 0.5 ng/ 渭 L, the best dilution multiple of the second antibody was 1:2 000 times, and the positive cells infected by AEC were reddish brown. The detection of common porcine epidemic diarrhea virus, porcine rotavirus and porcine circovirus type 2 were negative and had good specificity. At the same time, this method can observe the distribution of virus in the cells under the ordinary microscope. The method established in this study provides an effective method for the laboratory identification of TGEV and the localization and dynamic distribution of TGEV in infected cells.
【作者单位】： 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队;
【基金】：国家自然科学基金项目(31172350、31572541、31502092) 国家重点实验室资助项目(SKLVBP2015005)
【分类号】：S852.65

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王劭;朱小丽;朱晓琳;陈少莺;林锋强;陈仕龙;程晓霞;李兆龙;江斌;;猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析[J];农业生物技术学报;2013年01期

2 房红莹;窦守强;罗满林;;猪呼吸道冠状病毒研究进展[J];中国畜牧兽医文摘;2007年06期

3 唐芳;何孔旺;侯继波;姜平;;猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白5'端基因重组腺病毒的构建及其免疫特性[J];农业生物技术学报;2009年01期

4 房红莹;罗满林;;猪传染性胃肠炎病毒反向遗传研究进展[J];畜牧与兽医;2008年04期

5 ;Complete Genomic Sequence of Transmissible Gastroenteritis Virus TS and 3' End Sequence Characterization Following Cell Culture[J];Virologica Sinica;2010年03期

6 李建强;柳纪省;程杰;兰喜;殷相平;李宝玉;李学瑞;杨彬;娄忠子;吴润;;猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析[J];生物技术通报;2009年04期

7 黄小波;邓飞;曹三杰;文心田;杨恒;李春松;张鑫淼;张亮;;传染性胃肠炎病毒(TGEV)双启动子真核表达载体pVAXD-N/S的构建与鉴定[J];农业生物技术学报;2012年10期

8 ;Biological Characteristics and Etiological Significance of Porcine Respiratory Coronavirus(PRCV)[J];Journal of Northeast Agricultural University(English Edition);2009年02期

9 程杰,柳纪省,吴润,殷相平;猪传染性胃肠炎病毒的分子生物学研究进展[J];中国兽医科技;2003年12期

10 丁利;陈光达;许信刚;童德文;;猪传染性胃肠炎病毒陕西株的分离鉴定[J];中国兽医杂志;2011年10期

相关会议论文 前10条

1 邹勇;周燕;王建超;华平;何锡忠;苏万国;唐永兰;钱永清;;应用微载体技术生产TGEV试验研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（下）[C];2005年

2 邹勇;周燕;王建超;华平;何锡忠;苏万国;唐永兰;钱永清;;应用微载体技术生产TGEV试验研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年

3 ;Inhibition of porcine Transmissible gastroenteritis virus (TGEV) replication in mini-pigs by shRNA[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年

4 杨百亮;冯力;赵翠萍;孙东波;张建斌;;抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

5 周燕;王建超;华平;邹勇;谭文松;;猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)在ST细胞中的增殖规律[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年

6 俞伏松;王劭;陈仕龙;程晓霞;黄梅清;江斌;邵良平;陈少莺;;猪传染性胃肠炎病毒福建株的分离与鉴定[A];2012年福建省畜牧兽医学术年会论文集[C];2012年

7 李霞;张春红;赵亚华;张建峰;;TGEV和PEDV多重RT-PCR检测方法的建立及其细胞分离培养研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年

8 黄小波;曹三杰;文心田;;猪传染性胃肠炎病毒检测基因芯片的初步构建[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年

9 黄小波;曹三杰;文心田;;猪传染性胃肠炎病毒检测基因芯片的初步构建[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集（下册）[C];2006年

10 李娜;黄小波;曹三杰;文心田;;猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年

相关博士学位论文 前10条

1 马瑞丽;猪传染性胃肠炎病毒感染ST细胞差异蛋白质组学研究[D];西北农林科技大学;2015年

2 胡晓亮;猪传染性胃肠炎病毒HX株的分离与鉴定及其PL蛋白对抗IFN-β的分子机制[D];东北农业大学;2015年

3 宋祥军;microRNA在TGEV感染PK-15细胞过程中的作用与调控机制[D];西北农林科技大学;2016年

4 王雪飞;中药复方体外抗TGEV诱导猪小肠黏膜上皮细胞凋亡的机制研究[D];内蒙古农业大学;2016年

5 郭锦s，

本文编号：1670238