一株鸡传染性贫血病毒强毒株的分离鉴定及其致病性和生物信息学分析

发布时间：2018-03-28 10:19

  本文选题：鸡传染性贫血病毒　切入点：SPF鸡　出处：《山东农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：鸡传染性贫血病(Chicken infectious anemia,CIA)主要造成淋巴组织萎缩,雏鸡再生障碍性贫血,骨髓脂肪化,皮肤和肌肉出血,导致免疫抑制,引起继发感染或其它病原混合感染进而造成巨大损失。在世界主要的养禽国,鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)已经普遍流行,其给养禽业带来的损失日益严重,已经逐渐成为一个全球性问题。该病毒还是禽弱毒疫苗中常见的外源病毒污染物之一,为此我们人工模拟了使用CAV低剂量污染的弱毒疫苗对SPF鸡的影响。有报道称CAV主要对雏鸡具有较强的致病性,对日龄较大的鸡危害则不明显,本研究从某表现明显贫血症状的日龄较大鸡群中分离鉴定到一株CAV野毒株,通过系统的动物实验观察了该毒株不同感染剂量和不同感染日龄的致病性,并对其基因组进行了深入分析。1、弱毒疫苗中CAV低剂量污染对SPF鸡体重和疫苗免疫抗体的影响为了观察使用污染有低剂量CAV弱毒疫苗后对鸡免疫和体重的影响,本试验通过人工模拟试验观察了CAV低剂量污染对SPF鸡体重以及对NDV疫苗抗体产生的影响。结果显示免疫接种污染10个EID50/羽和5个EID50/羽两种剂量CAV的NDV疫苗后均造成了SPF鸡体重显著下降;并且NDV抗体水平与使用无污染疫苗组相比也显著降低了。使用污染两种剂量CAV的NDV疫苗后第2周开始均检测到一定比例的CAV抗体阳性,而通过核酸检测在使用污染疫苗后第1周就检测到很高比例的CAV核酸阳性。研究结果不仅展示了弱毒疫苗中CAV污染对SPF鸡生产性能和免疫机能的影响,也提示我们在通过SPF鸡检查法检测外源病毒污染时增加对病毒核酸检测有助于节省检测时间和提高检出率。2、CAV分离株对1日龄SPF鸡的致病性山东某种鸡场部分2月龄鸡生长迟缓,随后个体差异逐渐变大,其临床表现为鸡冠、肉垂苍白。病理剖检的主要特征是小腿骨骨髓呈粉红色甚至淡黄色,胸腺萎缩。原始病料经接种鸡胚后,提取DNA经斑点杂交检测为CAV阳性,证实成功分离到一株CAV野毒株,命名为CAV-SD15株。将CAV-SD15株分别以150EID50,300EID50,700EID50,1500EID50四个剂量通过肌肉注射感染1日龄SPF鸡,同时设置空白对照组研究其不同攻毒剂量下对1日龄SPF鸡的致病性,每周对各组鸡体重、血液指标、抗体水平及病毒血症检测,同时记录死亡率,第三周时全部剖杀检测免疫器官指数。试验结果显示,相对于空白对照组,不同剂量感染组均能够引起显著的生长迟缓和免疫抑制(p0.05),感染组的胸腺指数和法氏囊指数以及NDV疫苗的抗体水平显著降低(p0.05),但是150EID50和300EID50两个攻毒剂量组之间部分结果差异不显著。不同攻毒剂量下均能造成鸡群一定的死亡率,1500EID50剂量攻毒组死亡率可达65%(7/20)。3、CAV分离株对10周龄SPF鸡的致病性由于CAV一般只造成雏鸡发病,但本毒株分离自2月龄发病鸡,因此本研究针对10周龄的SPF鸡进行攻毒试验,观察该分离株对大日龄SPF鸡的致病性。将CAV-SD15株以1500EID50的剂量肌肉注射10只10周龄SPF鸡,同时设空白对照组。五周内每周对各组鸡的体重、血液指标、抗体水平及病毒血症检测,在15周时所有鸡只剖检同时测定免疫器官指数。结果显示,尽管感染组没有发现鸡发病死亡,但相对于空白对照组,感染组表现出了显著的生长迟缓和免疫抑制(p0.05),免疫抑制的主要体现是感染组的胸腺指数和法氏囊指数显著降低以及AIV-H9疫苗的抗体水平显著降低(p0.05)。感染组表现出了明显的贫血症状,剖检可见骨髓严重黄化,红细胞数目最低仅为空白对照组的50%左右,这表明该分离毒株对大日龄SPF鸡也有明显的致病性。4、CAV分离株全基因组分析经过扩增测序得到CAV分离株的全基因组序列后,应用MEGA、BioEdit等生物信息学软件对CAV-SD15分离株的遗传进化关系以及编码区氨基酸进行分析。结果显示,SD15分离株与分离自台湾的CAV18分离株同源性最高(98.9%),与分离自美国的NC001427株同源性最低(93.9%)。遗传进化树可以发现所比对的34个分离株主要分为两个分支,SD15株在第二个分支上,并且与CAV18台湾株分布于同一个小支上,显示了较近的亲缘关系;SD15株有16个氨基酸位点与其他参考毒株有较大差异,其中有两个氨基酸位点的突变是之前从未发现过的,分别为VP1蛋白210位的苯丙氨酸变异为丝氨酸,VP3蛋白25位的亮氨酸变为丝氨酸。在VP3凋亡蛋白区域,SD15有两个明显的氨基酸突变且突变发生在弱凋亡诱导域内部,我们推测可能是该突变增强了弱凋亡诱导域的凋亡作用从而导致了SD15株毒力的增强。
[Abstract]:In order to observe the effect of low dose of CAV on the immune and body weight of SPF chickens , the effect of low dose of CAV on the body weight and immune function of SPF chickens was observed .

【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

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本文编号：1675901