鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定

发布时间：2018-03-30 22:25

  本文选题：鸡毒支原体　切入点：热休克蛋白GrpE　出处：《中国预防兽医学报》2017年01期

【摘要】：鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株grp E基因,并利用表达纯化的重组蛋白GrpE(rGrpE)免疫BALB/c小鼠。制备抗GrpE的单克隆抗体(MAb)。通过亚细胞定位,结果显示GrpE定位于细胞表面。通过激光共聚焦显微镜观察到rGrpE对DF-1细胞具有明显的粘附作用,而且利用抗GrpE的MAb能够特异抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附。此外,夹心ELISA和流式细胞术试验结果也表明制备的MAb能够显著抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附,并呈剂量依赖关系。上述结果表明热休克蛋白GrpE是MG的一种新的具有粘附特性的蛋白。
[Abstract]:The adhesion characteristics of MG- lipid associated protein (lamps) play an important role in the infection of host cells. In our laboratory, rapid protein liquid chromatography and mass spectrometry were used to identify the GrpE protein encoded by MG grp E gene as heat shock protein. In order to further identify whether the GrpE protein has adhesion properties, we expressed the grp E gene of MG strain by prokaryotic expression. BALB/c mice were immunized with the purified recombinant protein GrpEr GrpE. Monoclonal antibody against GrpE was prepared. The results showed that GrpE was located on the surface of DF-1 cells, and the adhesion of rGrpE to DF-1 cells was observed by confocal laser microscopy, and the adhesion of MG membrane proteins to DF-1 cells was specifically inhibited by anti-#en3# MAb. The results of sandwich ELISA and flow cytometry also showed that the prepared MAb could significantly inhibit the adhesion of MG membrane protein to DF-1 cells in a dose-dependent manner.
【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队;东北农业大学动物医学学院;吉林农业大学动物科技学院;
【基金】：2016兽医生物技术国家重点实验室动物支原体创新团队经费
【分类号】：S852.62

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