鸡源解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其对肉鸡的饲用效果

发布时间：2018-04-04 08:58

本文选题：解淀粉芽孢杆菌　切入点：肉鸡　出处：《华南农业大学》2016年硕士论文

【摘要】：为寻找新型饲料添加剂,减少抗生素滥用带来的危害,本试验拟从鸡肠道中筛选出可作为鸡的益生菌芽孢杆菌,开展本试验。试验一:鸡源芽孢杆菌的筛选和鉴定:在无菌条件下从一只健康肉鸡内脏中取出约1 cm回肠样,经10 ml灭菌生理盐水洗去内容物;回肠样转入含500μl 0.016%二硫基苏糖醇(DTT)的1.5 ml的离心管中,涡旋15 min以洗下小肠粘膜上的细菌;离心取上清液;上清液经热处理(65℃,45 min)以杀死细菌营养体,后以MH平板分离出芽孢菌。上述芽孢菌液接入20 ml MH肉汤培养24 h,离心所得菌体分别经模拟胃液和模拟小肠液处理12 h以选出耐受菌;耐受菌经DSM液培养促进芽孢生成,经热处理(65℃,45 min)后涂布于MH平板以选出多株耐受模拟胃液和模拟小肠液的芽孢菌。上述多株芽孢菌进一步经LBST琼脂和含指标菌(大肠杆菌E.coli K88)的MH琼脂的检测,筛选出淀粉酶、蛋白酶和抗菌物质的外泌能力均最强的一株芽孢杆菌,并以16SrDNA分子生物学分类法确认其种属属性。从耐受模拟胃液和模拟小肠液的53株芽孢菌中,分别经53孔的LBST琼脂平板、酪蛋白琼脂平板和含指示菌(大肠杆菌E.coli K88)的MH琼脂平板的检测,筛选出淀粉酶、蛋白酶和抗菌物质的外泌能力均较强的一株芽孢杆菌(编号为Y);经16S rDNA分子生物学分类法鉴定,此株菌为解淀粉芽孢杆菌,被命名为解淀粉芽孢杆菌Y。试验二:芽孢杆菌筛选株对肉鸡的饲用效果试验:600只11日龄麻黄公鸡,随机分成4个饲粮组,每组3个重复,每重复50只,分3个生长阶段(11~21日龄、22~42日龄和43~70日龄)开展饲养试验。对于每个生长阶段,4组鸡分别饲喂4种试验饲粮(粉料);试验鸡自由采食饮水,每天24 h维持光照。对于每生长阶段,4种试验饲粮的组成分别为:基础饲粮;基础饲粮+芽孢菌预混剂(10 mg.kg-1)(1×106CFU/g);基础饲粮+芽孢菌预混剂(100 mg.kg-1)(1×107 CFU/g);基础饲粮+芽孢菌预混剂(1000 mg.kg-1)(1×10~8 CFU/g)。对每生长阶段,测定各组生产性能指标。在最后生长阶段的结束时,从各组中采血清测定其生化指标,采小肠样测定小肠绒毛结构指标,采盲肠内容物测定盲肠微生物指标。在肉鸡生长的各个阶段,总体上,解淀粉芽孢杆菌显著性提高了肉鸡的总增重、平均日采食量和平均日增重(P0.05),降低了耗料增重比和死亡率(P0.05),有促进肉鸡生长性能的作用。血清的总蛋白、白蛋白和球蛋白随着芽孢添加量的增加而增加(P0.05);血清的尿素氮、脂多糖和丙二醛随着芽孢添加量的增加而降低(P0.05)。对于空肠,各组的隐窝深度CD差异不显著(P0.05),但绒毛高度VH和VH/CD值均随着芽孢添加量增加而增加;对于回肠,绒毛高度VH和VH/CD值均随着芽孢添加量增加而增加,其中1000组均显著高于对照组(P0.05);而隐窝深度CD随着芽孢添加量增加而降低(P0.05)。盲肠内容物大肠杆菌数随芽孢添加量增加而降低(P0.05);乳酸菌数随芽孢添加量增加而增加(P0.05);因而,乳酸杆菌/大肠杆菌值随芽孢添加量增加而增加,其中1000组显著高于对照组(P0.05)。结论:1、从健康鸡肠道中可分离出耐65℃高温、耐模拟胃液、耐模拟肠液、能产淀粉酶、蛋白酶和抑菌物质的解淀粉芽孢杆菌。2、饲粮中添加解淀粉芽孢杆菌Y 10~8CFU/g时,可改善肠道菌群和小肠绒毛结构,提高肉鸡的抗氧化能力、饲料转化率和采食量,从而可促进肉鸡生长。
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【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831.5

【参考文献】