安徽三株柔嫩艾美耳球虫的耐药性分析

发布时间：2018-04-05 16:02

  本文选题：鸡　切入点：柔嫩艾美耳球虫　出处：《安徽农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：鸡球虫病(Coccidiosis)是严重危害养鸡业的一种肠道寄生虫病,其中致病性最强、危害最大的是柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)。为了检测安徽省庐江县、青阳县和肥西县三个地区E.tenella的耐药性情况,分别采集庐江县、青阳县和肥西县三个地区的养鸡场球虫病患病鸡的盲肠内容物并培养,通过分离单卵囊进行分离纯化,根据卵囊的生物学特性和分子生物学技术进行纯种E.tenella卵囊的鉴定,为耐药性的检测奠定基础。本研究根据对庐江县、青阳县和肥西县三个地区进行调查,最终选定三个地区均经常使用的五种抗球虫药物作为检测药物,即磺胺氯吡嗪钠(Sulfachloropyrazine sodium)、地克珠利(Diclazuril)、妥曲珠利(Toltrazuril)、氨丙啉(Amprolium)以及氯羟吡啶(Clopidol)。分别采用抗球虫指数(ACI)、相对盲肠卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)和最适抗球虫活性百分率(POAA)四项指标进行综合耐药性判定;通过同工酶电泳分别获得上海标准株、南京标准株、各药物的耐药虫株和三个地理株的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)乳酸脱氢酶(LDH)、以及葡萄糖磷酸异构酶(GPI)的同工酶谱,通过比较酶谱间的差异进行耐药性分析;利用随机扩增多态性DNA(RAPD)的方法扩增上海标准株、南京标准株和三个地理株的基因,根据DNA条带的相似性与差异性观察耐药性的产生情况以及遗传变异情况。根据耐药性的检测结果,结合莫能霉素(Monensin)、尼卡巴嗪(Nicarbazin)和球虫酯(乙氧酰胺苯甲酯)(Ethopabate)的作用机制与作用峰期的特点,采用莫能霉素+尼卡巴嗪+球虫酯配合用药,以抗球虫指数、相对盲肠卵囊产量、病变记分减少率和最适抗球虫活性百分率四项指标综合判定疗效,筛选最佳的药物浓度。结果显示:利用琼脂小块分离球虫单卵囊的技术简单可靠,成功率高,分离后的卵囊经分子生物学技术和生物学特性鉴定均为纯种E.tenella,分别命名为庐江株、青阳株和肥西株;鸡体试验法检测可知庐江株球虫对妥曲珠利与氨丙啉敏感,对氯羟吡啶中度耐药,对地克珠利与磺胺氯吡嗪钠完全耐药;青阳株球虫对地克珠利与妥曲珠利敏感,对磺胺氯吡嗪钠与氯羟吡啶完全耐药,对氨丙啉中度耐药;肥西株球虫对磺胺氯吡嗪钠敏感,对地克珠利、氯羟吡啶和氨丙啉完全耐药,对妥曲珠利中度耐药;E.tenella上海标准株与南京标准株的均只含有一条LDH-2酶带,氨丙啉耐药株有一条特征性的LDH-3酶带,磺胺氯吡嗪钠耐药株与氯羟吡啶耐药株有一条不同于标准株的LDH-2酶带,地克珠利耐药株和妥曲珠利耐药株酶带与标准株的酶谱一致,三个地理株与耐药株有交叉条带,与鸡体试验检测结果相符;磺胺氯吡嗪钠耐药株与标准株含有GPI-1与GPI-2酶带,其余耐药株均有不同于标准株的特征性GPI同工酶带,庐江株与肥西株都与耐药株有交叉的GPI同工酶带,与鸡体试验检测结果一致,但是青阳株有一条不同于其他耐药株的GPI-5酶带,可能与青阳株球虫耐受其他抗球虫药物有关;G6PD同工酶检测中,标准株、磺胺氯吡嗪钠耐药株以及地克珠利耐药株均只含有G6PD-1一条酶带,因此不能通过G6PD同工酶判断球虫是否对这两种药物耐药,妥曲珠利耐药株、氯羟吡啶耐药株和氨丙啉耐药株都不同于标准株的G6PD同工酶谱,三个地理株的G6PD同工酶谱与耐药株有交叉,与鸡体试验检测结果一致,但青阳株有一条特有的G6PD-4酶带;RAPD分析结果中,各虫株之间的DNA条带不尽相同,相似值位于48.00%~72.00%之间,上海标准株与南京标准株之间的相似值最高,为72.0%,三个地理株与两个标准株之间的相似值处于较低水平,表明球虫耐药后发生了基因变异;莫能霉素110mg.kg-1+尼卡巴嗪125 mg.kg-1+球虫酯8 mg.kg-1治疗三个地区的E.tenella混合虫株,ACI为181.21,属于高效抗球虫药,能够有效解决庐江县、青阳县和肥西县三个地区的鸡E.tenella的耐药问题。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.31

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本文编号：1715462