口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用
本文选题：口蹄疫O型病毒 切入点：二温式RT-PCR 出处：《中国畜牧兽医》2017年02期
【摘要】：试验通过对口蹄疫病毒核苷酸序列的比对分析,在O型口蹄疫病毒的P1基因保守区,设计1对特异性引物,应用均匀设计法优化反应参数,建立口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法。对该法进行特异性试验、敏感性试验检测。结果表明,该二温式RT-PCR方法只对口蹄疫O型病毒敏感,对其他血清型的口蹄疫病毒及常见的猪病病毒均不敏感;扩增条带与预期目的片段大小相符,扩增片段经克隆、测序发现与引物所在基因序列的同源性为100%;检测病毒RNA的敏感性为1.665pg/μL,其敏感性与三步法PCR敏感性检测结果没有差异。运用该法对54头攻毒试验的动物进行检测,阳性鉴定结果与三步法PCR鉴定结果一致,与三步法PCR相比该法节省了20min,表明所建立的口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR方法是一种准确、快速、特异、敏感的检测方法。
[Abstract]:By comparing the nucleotide sequences of foot-and-mouth disease virus (FMDV), a pair of specific primers were designed in the P1 region of foot-and-mouth disease virus type O (FMDV), and the reaction parameters were optimized by uniform design method.A two-temperature RT-PCR method for the detection of foot-and-mouth disease virus type O (FMDV) was established.The specificity test and sensitivity test were carried out.The results showed that the two-temperature RT-PCR method was only sensitive to foot-and-mouth disease type O virus, but not to other serotypes of foot-and-mouth disease virus and common swine disease virus, and the amplified band was consistent with the expected target fragment size, and the amplified fragment was cloned.The result of sequencing showed that the homology of the gene sequence with the primer was 100, and the sensitivity of detecting virus RNA was 1.665pg/ 渭 L, which had no difference from that of three-step PCR sensitivity detection.The method was used to detect 54 head attack virus test animals. The result of positive identification was consistent with that of three-step PCR method. Compared with three-step PCR method, the method saved 20 minutes, which indicated that the two-temperature RT-PCR method of foot-and-mouth disease virus type O was accurate.Rapid, specific and sensitive detection method.
【作者单位】： 新疆农业大学动物医学学院;新疆畜牧科学院兽医研究所;天康生物股份有限公司;
【基金】：自治区科研机构创新发展专项资金(2016D04008) 自治区产学研联合培养研究生示范基地项目(xjaucxy-yjs-20152008)
【分类号】：S855.3
【参考文献】
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本文编号：1724581
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