亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊瘤胃上皮通透性的影响及其机制研究

发布时间：2018-04-12 07:18

本文选题：亚急性瘤胃酸中毒 + 脂多糖　；参考：《内蒙古农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：亚急性瘤胃酸中毒(SARA)是反刍动物常见的营养代谢疾病,但引起上皮损伤的主要诱因及其分子机制尚不明确。本研究将使用体内和体外试验方法共同评价SARA对奶山羊胃肠道上皮通透性的影响,并探索SARA影响瘤胃上皮通透性的分子机制。1.SARA对奶山羊瘤胃发酵参数和异常代谢产物的影响试验选用8只体况良好的泌乳期的萨能奶山羊,按体重相近原则随机分为两组,分别为对照组(n=4)和SARA组(n=4)。对照组饲喂日粮NFC/NDF=1.40,SARA组依次饲喂NFC/NDF为1.40、1.79、2.31和3.23的日粮诱导奶山羊发生SARA。结果显示:(1)与对照组相比,SARA组瘤胃pH低于5.5持续时间达3.98 h/d。SARA组瘤胃液乙酸含量和A/P显著降低(P0.05),丙酸、丁酸和TVFA含量显著升高(P0.05);(2)SARA组瘤胃液和血液中的脂多糖(LPS)和组胺(HIS)均显著增加(P0.05)。结果表明,SARA改变了瘤胃发酵模式,异常代谢产物增多。2.SARA对奶山羊胃肠道上皮通透性的影响试验动物与试验设计同试验一。动物屠宰前,分别从瘤胃瘘管灌注Cr-EDTA,收集48 h内的尿液,测定尿铬含量;动物屠宰后,立即采集瘤胃上皮,在Ussing chamber仪器上测定电生理指标及分子标记物(FITC,HRP)流速。结果显示:(1)与对照组比较,SARA组显著降低了瘤胃上皮PD值(P0.05),显著提高了瘤胃上皮Isc和Gt值(P0.05),以及FITC和HRP的流速(P0.05),提示SARA导致瘤胃上皮通透性增加;(2)SARA组显著增加了 Cr-EDTA的含量(P0.05),提示SARA破坏消化道上皮完整性,使其通透性增加。3.pH、LPS和HIS对奶山羊瘤胃上皮通透性的交互影响选用8只体况良好、体重、泌乳量相近的萨能奶山羊作为试验动物。试验设计采用3×3二因子,动物屠宰后采集瘤胃上皮,在Ussing chamber仪器半室上添加不同梯度pH,LPS,HIS组合,测定电生理指标及分子标记物(FITC,HRP)流速,浆膜侧HIS与LPS的浓度。结果显示,多因素pH×LPS,pH×HIS处理下,当pH=5.2×LPS 60处理,对瘤胃上皮Isc,Gt与FITC流速最高,达到显著水平(P0.05),瘤胃上皮PD值较低,达到显著水平(P0.05);互作效应对浆膜侧LPS浓度和瘤胃上皮HRP流速均无显著性影响(P0.05);pH与HIS的互作效应中看出,瘤胃上皮Isc值在pH=5.2×HIS 10处理下均显著高于其它处理组(P0.05),Gt值在pH=5.5×HIS 10处理下均显著高于其它组(P0.05),PD值在pH=5.5×HIS10处理下均显著低于其它处理组(P0.05),HRP流速在pH=5.2×HIS 10处理下显著高于pH=5.5×HIS 10处理组,同时高于pH=7.4×HIS10处理但差异不显著(P0.05),浆膜侧HIS浓度在pH=7.4×HIS0.5处理下显著高于其它处理组(P0.05)。不同pH×LPS×HIS处理组对瘤胃上皮Isc,Gt,PD及FITC流速有显著影响(P0.05);当pH×LPS×HIS处理组为5.5×60×10时瘤胃上皮Isc最高,PD最低,组间差异均显著(P0.05),瘤胃上皮Gt在pH×LPS×HIS处理组为5.2×60×10时达到最高值,组间差异显著(P0.05)。瘤胃上皮FITC流速在pH=5.5×LPS60×HI310处理组时显著高于其它两个处理组(P0.05),且这两个处理组间差异不显著(P0.05)。HRP流速在pH=5.2处理组时高于其它处理组,但差异不显著(P0.05)。不同pH×LPS×HIS处理组对浆膜侧LPS与HIS浓度影响差异不显著(P0.05)。综上结果表明,单因子pH=5.2时对瘤胃上皮通透性影响最严重,二因素pH=5.2×HIS10与pH=5.2×LPS 60处理及三因素pH=5.5×LPS 60×HIS 10处理对瘤胃上皮通透性影响均显著。4.pH、LPS和HIS对奶山羊瘤胃上皮细胞紧密连接蛋白表达的交互影响试验动物与试验设计同试验三,Ussingchamber仪器半室上添加pH、LPS、HIS组合处理培养后的瘤胃上皮,测定其紧密连接蛋白Claudin-1,Claudin-4,Claudin-7,Occludin与ZO-1基因的mRNA表达量,结果显示:(1)pH与LPS的交互作用显著降低 Claudin-1 和 Claudin-7 mRNA 表达量(P0.05),Claudin-4 和 Occludin mRNA表达量变化不显著(P0.05)。pH与LPS共同影响下,ZO-1mRNA表达量有整体升高的趋势,且在pH=5.2×LPS60时最高,显著高于对照组(P0.05);(2)pH与HIS的交互作用,Claudin-1基因在pH=5.5×HIS 0.5处理下其表达量最低,Claudin-7 mRNA表达量在pH=7.4×HIS10处理下显著低于对照组(P0.05),ZO-1mRNA表达量与对照组比较,呈升高趋势,且当pH=5.2×HIS10处理时,显著升高(P0.05)。(3)pH=5.2×LPS 60×HIS 10 处理 Claudin-1 mRNA 表达量较 pH=5.5×LPS 60×HIS 10与 pH=7.4×LPS 60×HIS 10 处理其表达量显著降低(P0.05),Claudin-4 mRNA 表达量影响不显著,但与对照组比较有降低趋势。Claudin-7 mRNA表达量与对照组比降低,且在 pH=5.2×LPS 60×HIS 10 处理下降低最显著(P0.05),降低了99%。Occludin mRNA表达量在pH=5.2×LPS 60×HIS 10处理下与对照组比显著升高(P0.05)。2O-1 mRNA 表达量在 pH=7.4×LPS 60×HIS 10 处理下显著高于 pH=5.5×LPS 60×HIS 10 与pH=5.2×LPS60×HIS10处理(P0.05),且与对照组相比,显著升高(P0.05)。以上提示SARA发生后,pH、LPS和HIS三因素交互作用于瘤胃上皮,降低瘤胃上皮紧密连接蛋白表达量,进而增大瘤胃黏膜通透性。上述结果表明:(1)SARA使瘤胃上皮通透性增加,这与紧密连接蛋白表达量下降有关。(2)SARA引起瘤胃上皮通透性增加时pH,LPS和HIS共同发挥作用。
[Abstract]:The results showed that SARA significantly decreased the gastric epithelial permeability of milk goats ( P0.05 ) . The results showed that SARA significantly decreased the gastric epithelial permeability of milk goats ( P0.05 ) . At pH = 5.5 脳 10 脳 10 ~ ( 10 ) , there was no significant difference ( P < 0.05 ) . The difference between pH value and pH = 5.5 脳 HIS10 treatment group was significantly higher than that in other treatment groups ( P0.05 ) . The expression of Claudin - 7 mRNA was significantly lower than that of control group ( P0.05 ) . The expression of Claudin - 7 mRNA was significantly higher than that of control group ( P0.05 ) . ( 2 ) When SARA causes increased permeability of rumen epithelial cells , LPS and HIS function together .

【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.27

【参考文献】