鸽子瘦素基因成熟肽重组蛋白的表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2018-04-15 09:18

  本文选题：鸽子瘦素 + 成熟肽序列　； 参考：《江苏农业学报》2017年01期

【摘要】：根据鸽子瘦素基因(leptin)编码区序列(Gen Bank:HG797022)设计并合成鸽子leptin基因编码胞外域成熟肽的c DNA序列,然后将这段序列克隆到表达载体p GEX-4T-1的Eco R I与Not I酶切位点之间,构建重组表达载体(p GEX-4T-1-leptin)并将该载体转化到大肠杆菌Arctic Express中。转化菌经IPTG诱导后表达了分子量为44 270的鸽子leptin重组蛋白。经镍柱亲和层析纯化后的重组蛋白质与矿物油佐剂混合,免疫日本大耳白兔,制备抗leptin多克隆抗体。经过4次免疫之后,获得高效价的抗leptin多克隆抗体。
[Abstract]:The c DNA sequence encoding extracellular mature peptide of pigeon leptin gene was designed and synthesized according to the encoding region of pigeon leptin gene, GenBank: HG797022). The sequence was cloned between Eco RI and Not I sites of expression vector p GEX-4T-1.A recombinant expression vector, pGEX-4T-1-leptinin, was constructed and transformed into Escherichia coli Arctic Express.The recombinant protein of pigeon leptin with molecular weight of 44 270 was expressed after induction by IPTG.The recombinant protein purified by nickel affinity chromatography was mixed with mineral oil adjuvant to immunize Japanese white rabbits to prepare polyclonal antibodies against leptin.After 4 times of immunization, a high titer anti leptin polyclonal antibody was obtained.
【作者单位】： 江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良与繁育重点实验室;广东省家禽研究所;
【基金】：国家自然科学基金项目(31501946) 江苏省自然科学基金项目(BK20150544)
【分类号】：S836

【参考文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1753485