新城疫重组病毒rmNA-1弱毒疫苗候选株免疫效果评价研究

发布时间：2018-04-15 12:03

  本文选题：新城疫 + 重组病毒　； 参考：《吉林大学》2017年硕士论文

【摘要】：新城疫是危害我国养禽业最严重的疫病之一,世界各国对新城疫的防控和研究一直十分重视。有研究表明,基因Ⅶ型已成为我国新城疫病毒流行的主要优势基因型,而目前广泛使用的新城疫弱毒疫苗(如La Sota)均属于基因Ⅱ型,虽然在降低发病率和死亡率上能够提供保护,但免疫鸡的组织器官在强毒感染下仍会产生病变。使用与流行毒株相同基因型的疫苗,不仅能有效降低攻毒后免疫鸡群的排毒时间,而且能显著减少喉气管和泄殖腔中的病毒含量。因此,使用与流行基因型一致的疫苗株来防控新城疫,对于有效控制疫情的发展具有绝对优势,所以研制新城疫基因Ⅶ型弱毒疫苗迫在眉睫。本研究是以新城疫重组突变株rm NA-1为研究对象,评价其在鸡胚内继代以及鸡体内继代的遗传稳定性、免疫安全性及免疫效力,并与当前最常使用的商品疫苗La Sota作免疫效果的比较,为研制与当前流行株相匹配的疫苗候选株奠定基础。同时,该研究也是为了完成农业部“新城疫诊断与防控及示范”专项并为申报新兽药证书提供实验依据。主要内容如下:Ⅰ.重组病毒rm NA-1株遗传稳定性试验为了确定新城疫突变致弱重组病毒rm NA-1的遗传稳定性,本部分研究进行鸡胚内继代遗传稳定性试验和鸡体内继代遗传稳定性试验。重组病毒在鸡胚传至10代保持遗传稳定性,在此基础上继续传至24代,突变位点依旧保持稳定遗传,未发生回复突变,表明突变致弱株rm NA-1至少能在鸡胚内稳定遗传24代。此外,为了更好确定重组病毒的稳定性,本研究进行了动物回归实验。重组病毒在鸡体内连续传至6代,重组病毒依旧保持遗传稳定性,表明突变致弱株rm NA-1至少能在鸡体内稳定遗传6代。因此,遗传稳定性良好的基因Ⅶ型重组致弱株rm NA-1具有成为新一代新城疫疫苗种毒的前景。Ⅱ.重组病毒rm NA-1株实验室安全性试验为了确保rm NA-1株病毒的安全性,本部分研究使用rm NA-1鸡胚尿囊液(约为使用剂量的100倍)以滴鼻的方式接种3日龄SPF雏鸡10只。两周后,所有雏鸡均未出现新城疫临床症状,剖检也未出现组织病变,表明此疫苗候选株安全性良好。Ⅲ.重组病毒rm NA-1株实验室免疫效力试验为了测定重组病毒rm NA-1疫苗候选株的最小免疫剂量,本部分研究按不同病毒含量接种7日龄SPF雏鸡,三周后攻毒,统计各组鸡群存活率,测得重组病毒rm NA-1弱毒株的最小免疫剂量为5×104EID50。为了判断rm NA-1疫苗候选株对鸡群的免疫效力,以2×106EID50接种剂量免疫7日龄SPF雏鸡40只,免疫后持续监测HI抗体水平,并分别于免疫后3周、6周、7周、8周、9周、10周六个时间点,随机抽取5只免疫后SPF雏鸡,以105ELD50攻毒剂量接种新城疫NA-1强毒株,统计结果表明各时间点鸡只的存活率均为100%,确定重组病毒rm NA-1疫苗候选株的免疫持续期至少为8周。Ⅳ.与商品疫苗La Sota株进行免疫效果比较通过比较商品疫苗和重组疫苗免疫后以及攻毒后鸡群的HI抗体水平,重组病毒组HI抗体水平在攻毒后迅速大幅度下降后上升,随即恢复平稳;而商品疫苗组的HI抗体水平未见波动而直接上升。结果能够体现出当流行毒株和疫苗株的基因型与抗原性相匹配时,疫苗所产生的抗体会中和一定量的病毒,后迅速刺激机体产生免疫应答。商品疫苗组虽在临床表现和存活率上和重组疫苗组结果一致,但攻毒后商品疫苗组鸡只的体重增长情况远远低于重组疫苗组,且口咽和泄殖腔排毒的时间更长;商品疫苗组病理组织切片也显示出有一定的病变,表明商品疫苗免疫鸡群在受到新城疫NA-1强毒株感染后,对动物本身的损伤无法避免。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.4

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本文编号：1754031