CAPN1基因和CASP9基因在牛骨骼肌形成中的功能作用研究

发布时间：2018-04-17 18:50

本文选题：骨骼肌卫星细胞 + 分离培养　；参考：《河南科技大学》2017年硕士论文

【摘要】：牛肉的品质特性受到肌纤维类型和直径等特征的影响,而肌纤维直径的增大和肌纤维的类型转化等是随着畜禽生长发育的进行在不断变化,此生物学过程是受到骨骼肌卫星细胞的发育调控。研究发现,钙蛋白酶I(CAPN1)基因和凋亡相关基因caspase-9(CASP9)是与骨骼肌生长发育密切相关的两个重要基因。以牛骨骼肌卫星细胞为研究对象,并选取与骨骼肌生长发育相关的候选基因来研究肉品质,正成为肉品质研究的新方向,将会有效促进肉品质的改善。(1)本研究采用0.1%的I型胶原酶和0.25%的胰蛋白酶联合使用的两步酶消化法成功分离并提取出牛原代骨骼肌卫星细胞。并在体外成功培养了骨骼肌卫星细胞,通过绘制细胞生长曲线发现细胞生长状态较好,也成功对其进行纯化、冷冻保存与复苏以及相应的诱导分化,细胞在传代至第3~4代时纯度高,且传代培养后和细胞复苏后的细胞生物学特性稳定。(2)本研究通过免疫细胞化学染色技术成功鉴定了牛骨骼肌卫星细胞,牛骨骼肌卫星细胞表面标志均呈阳性表达,符合其标志物的表达特性。通过反转录PCR检测技术,根据凝胶电泳结果显示其亮度情况,表明经过传代培养后,牛骨骼肌卫星细胞在体外扩增培养仍能具有骨骼肌卫星细胞的特性。(3)本研究发现钙蛋白酶系统成员CAPN1和CAPN3以及半胱天冬酶系统成员CASP3、CASP7和CASP9均能够在牛骨骼肌卫星细胞中表达,随着牛骨骼肌卫星细胞的增殖分化,它们的表达量均处于变化中,这就表明CAPN1基因和CASP9基因均在肌生成的进程中扮演着不可或缺的角色。同时,我们发现CAPN1基因和CASP9基因在骨骼肌卫星细胞中的表达量情况与其在骨骼肌肌肉组织的表达量情况无相关性,所以,我们认为骨骼肌卫星细胞生长发育的进程与宰后肌肉组织嫩化的进程不相关,并且这些基因的表达量变化并不能反映它们在肌肉组织中的变化情况。(4)本研究通过组织切片技术对不同年龄段的鲁西黄牛的肌纤维直径进行测定分析,研究结果表明随着鲁西黄牛年龄的增长,其肌纤维直径也在显著的增长。同时采用实时荧光定量PCR技术对不同年龄段的鲁西黄牛的背最长肌中CAPN1和CASP9的mRNA表达情况进行分析,并将其与肌纤维直径进行相关性分析,研究结果表明CAPN1基因m RNA的表达与肌纤维直径存在显著负相关,而CASP9基因mRNA的表达与肌纤维直径呈正相关,但不显著。本研究建立起牛骨骼肌卫星细胞分离和纯化的方法,建立起牛骨骼肌卫星细胞的体外扩增培养体系。获取了CAPN1基因和CASP9基因在牛肌肉生长发育过程中mRNA的表达规律及变化趋势,并获得了CAPN1基因和CASP9基因mRNA的表达与肌纤维直径间的关系,在理论上为阐明牛骨骼肌生长发育的分子机理和相关候选基因的网络调控机制提供重要的数据支撑。
[Abstract]:The results showed that the expression of CAPN1 gene and CASP9 gene in skeletal muscle satellite cells was not correlated with the growth and development of skeletal muscle .

【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S823

【参考文献】