猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定

发布时间：2018-04-18 08:59

  本文选题：猪肺泡巨噬细胞 + PRRSV　； 参考：《中国兽医学报》2017年04期

【摘要】：为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白质间相互的作用,本研究使用SMART技术成功构建了猪肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库。首先提取PAM总RNA,使用SMART RACE法经LD PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,通过同源重组的方法将双链cDNA与pGADT7-Rec质粒共转化进酵母Y187感受态,再利用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选阳性克隆,最终构建的文库滴度达到了6.96×10~7 CFU/mL,重组率初步计算达到95%,插入片段范围在200~2 000bp。本研究为PRRSV致病蛋白的筛选以及相关疾病的研究奠定了基础。
[Abstract]:In order to study the interaction between porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSVV) and porcine alveolar macrophages (PAM) protein, a two-hybrid cDNA library of porcine reproductive and respiratory syndrome virus was successfully constructed using SMART technique.At first, PAM was extracted and synthesized by LD PCR using SMART RACE method. The double-stranded cDNA and pGADT7-Rec plasmid were co-transformed into yeast Y187 by homologous recombination by SMART technique, and then the positive clones were screened on the SD/-Leu plate by the method of nutrition deficiency.The titer of the constructed library reached 6.96 脳 10 ~ (7) CFU / mL, the recombination rate reached 95%, and the inserted fragment ranged from 200 ~ 2 000 BP.This study laid a foundation for the screening of PRRSV pathogenic proteins and the study of related diseases.
【作者单位】： 内蒙古民族大学动物科学技术学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31460662)
【分类号】：S858.28

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本文编号：1767672