兔出血症病毒特异性核酸适配体的筛选

发布时间：2018-04-27 04:43

  本文选题：兔出血症病毒 + 适配体　； 参考：《中国动物传染病学报》2017年02期

【摘要】：为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60为靶分子,使用消减SELEX技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)进行20轮的筛选,以生物素标记的次级文库作为"一抗",以辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素作为"二抗",对文库进行Western blot鉴定,结果表明第20轮文库存在可特异性的识别VP60的核酸序列。随机选取第20轮文库的46条序列克隆、测序,得到20个高度同源序列,同时对46个适配体再次鉴定,最终得到3个特异性识别VP60的适配体。
[Abstract]:In order to screen rabbit hemorrhagic disease virus capsid protein VP60 specific aptamer and to establish a new method for detecting rabbit haemorrhagic disease hemorrhagic, a 80 NT random oligonucleotide library was constructed in this study. Using VP60 immobilized on PVDF membrane as target molecule, subtractive SELEX technique was used for 20 rounds of screening, using subtractive evolution of ligands by exponential enrichment. The secondary library labeled by biotin was used as the "first antibody" and the horseradish peroxidase labeled chain enzyme avidin was used as the "second antibody" to identify the library. The results showed that there was a specific nucleic acid sequence to recognize VP60 in the 20th round of the library. 46 sequences of the 20th round library were randomly selected, and 20 highly homologous sequences were obtained by sequencing. At the same time, 46 aptamers were identified again, and finally 3 aptamers with specific recognition of VP60 were obtained.
【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;
【基金】：中国农业科学院创新团队科研项目
【分类号】：S852.65

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本文编号：1809267