内蒙古优势蜱种—草原革蜱的生物学特性及其潜在传播人和动物布鲁斯菌病的风险分析

发布时间：2018-05-02 00:00

本文选题：草原革蜱 + 16S　；参考：《内蒙古农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：内蒙古地区天然气候适合于蜱类的生存,随着全球大气候的变化,蜱虫等媒介生物的活动更加的频繁,其中草原革蜱(Dermacentor nuttalli)是该地区主要的优势蜱种之一。众所周知,蜱虫可以携带多种病原体,导致传播各种动物疫病。经过临床调查发现一些传统老病(如布鲁斯菌病和链球菌病等)均有复燃的态势。这种不明原因的广泛发病流行情况,可能与蜱虫等媒介生物的频繁活动关系密切。本研究具体研究内容如下:方法:在2015-2016年期间,选择内蒙古呼伦贝尔地区设立15个牧区采集点,从羊体表或草场收集蜱虫样本2120份,通过传统形态学方法和分子生物学鉴定方法(PCR方法扩增16S rRNA与ITS2基因)进行综合性分析,准确鉴定出婢虫的种类。经过Genetyx-Version 6生物软件分析16S rRNA基因的多态性。用Mega 6.06软件,将测序结果与GenBank数据库中已知蜱虫16S rRNA基因和ITS2基因进行类聚并绘制出其系统进化树。提取蜱成虫基因组DNA,运用常规PCR方法检测布鲁斯菌病特异性基因,并对所得结果进行统计分析。为了进一步说明问题,采集吸饱血的雌蜱带回实验室进行人工孵化,提取其各期蜱虫(成虫、若虫、幼虫和卵)的基因组DNA后,相同方法检测布鲁斯菌特异性基因产物。为更敏感的检测蜱虫体内的布鲁斯菌病原感染情况,采用TaqMan实时荧光定量PCR方法,在常规PCR方法检测出的阳性和阴性样品中,再进行TaqMan实时荧光定量PCR的检测,比较两种两种方法的敏感度,同时确定蜱虫样品中存在布鲁斯菌特异性基因的拷贝数。结果:经过对蜱的假头基、盾板、基节、缘垛和肛沟等特征性结构的观察,根据Walker等描述的草原革蜱典型形态学特征一致,初步确定我们采集的蜱虫为草原革蜱;从Mega 6.06软件绘制的16S rRNA和ITS2基因遗传进化树可知,我们收集的蜱虫与来自新疆、吉林、河北和俄罗斯的已知草原革蜱在同一分支上,与形态学鉴定结果吻合,属于草原革蜱内蒙古株,重新命名为D.nuttalliIMH;通过Gentyx软件分析16S rRNA基因多样性结果发现,15个不同地区的蜱虫之间存在较为显著的基因多态性;常规PCR方法检测布鲁斯菌特异性基因试验结果发现,15个采样点收集的蜱样中阳性率至少在50%以上,有的地方甚至达到90%以上,在常规PCR结果阳性和阴性样品中随机选取25份DNA样本中进行Real Time PCR试验结果发现,无论常规PCR试验结果阳性还是阴性,50份样本均显示阳性结果,布鲁斯菌特异性基因拷贝数最低者为16.39个拷贝(Ct值为37.07),最高者为2.4×105个拷贝(Ct值为23.67),同时在人工孵化的虫卵、幼虫、若虫的基因组DNA样品中均检测到布鲁斯菌特异性基因产物。结论:草原革蜱是内蒙古呼伦贝尔地区每年3至7月间活动的优势蜱种,而且不同采样地区的蜱虫之间也存在着较为丰富的基因多态性。吸饱宿主血的草原革蜱几乎都能携带布鲁斯菌,更为严重的后果是草原革蜱可能经卵垂直传播布鲁斯菌并能够长期携带。草原革蜱可能是布鲁斯菌病的新的一种媒介生物,具有传播人和动物布鲁斯菌病的潜在风险。
[Abstract]:In order to further illustrate the genetic evolution of the 16S rRNA gene and ITS2 gene , it is known that tick insects can carry a variety of pathogens , which may lead to the spread of various animal epidemic diseases . The results showed that the positive rate of the samples collected from 15 sampling points was at least 50 % and the highest was 2.4 脳 105 copies ( Ct value of 23.67 ) .

【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.746

【参考文献】