内含NDV核酸的耐核糖核酸酶病毒样颗粒作为荧光定量RT-PCR内标的制备与鉴定

发布时间：2018-05-03 02:10

  本文选题：新城疫 + 耐核糖核酸酶　； 参考：《畜牧与兽医》2017年06期

【摘要】：为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合成和klenow酶连接技术制备内标片段,将内标片段插入pET32a-MS2重组质粒,构建pET32a-MS2-IC重组质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经RNase和DNase消化后,采用荧光RT-PCR检测耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标的含量。结果表明,制备了高表达量耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标,可用于新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立。
[Abstract]:In order to prepare the real - time fluorescent RT - PCR virus - like particle internal standard for the detection of Newcastle disease virus , the mature enzyme protein and capsid protein sequence of the 2 2 phage were amplified , and the recombinant plasmid pET32a - 2 2 was constructed by the method of chemical synthesis and klenow enzyme ligation .

【作者单位】： 宣城市畜牧兽医局;宣州区畜牧兽医管理局;安徽华卫集团禽业有限公司;
【分类号】：S852.65

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