H5亚型禽流感病毒HA与NA基因的适配性研究

发布时间：2018-05-20 00:38

本文选题：H5 + 亚型AIV　；参考：《扬州大学》2016年硕士论文

【摘要】：H5亚型高致病性禽流感(Avian influenza, AI)是重要的人兽共患病,是世界动物卫生组织规定的法定通报传染病之一,在多个国家流行。它不仅给养禽业带来了巨大的经济损失,同时也严重威胁着人类的健康。为了适应宿主与环境的变化,禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)以极快的速度发生着变异,其中的一些优势变异株会在不断进化的过程中存活下来。通过对AIV的监测发现,近年来,Clade 2.3.4已成为我国大部分地区的主要流行分支之一,并且其次分支中出现了大量不同亚型的重组病毒。因此,我们选取Clade 2.3.4和Clade 2.3.4.4中2种不同的HA(SY、JY株),分别与3种不同亚型NA(NA1、NA2、NA8)组合,构建出一系列重组病毒,通过比较其生物学特性和致病性的差异,来评价Clade 2.3.4中禽流感病毒HA与NA基因的适配性。1禽流感病毒的筛选纯化及不同HA和NA组合重组病毒的构建先通过序列比对以及特殊位点分析筛选出母本毒株SY(A/mallard/Huadong/S/2005,H5N1)和JY (A/duck/Eastern China/2014, H5N8), AIV SY株属于Clade 2.3.4; AIV JY株属于Clade 2.3.4.4。分析其HA连接肽序列发现SY株为PLRERRR-KR↓G,与Re-5疫苗株一致,而JY株则为PLREKRR-KR↓G,有一个位点的突变,并且JY株HA蛋白上170位糖基化位点是缺失的。试验采用Hoffmann 8质粒拯救系统,以SY株内部基因为骨架,将SY与JY的HA分别与1个NA1、2个NA2和2个NA8组合,利用反向遗传技术构建出HA与NA组合的10株重组病毒,分别命名为SY、SY-ZJ、 SY-CZ、SY-JYD、SY-JY、JY-SY、JY-ZJ JY-CZ、JY-JYD和JY。测序证明病毒基因序列的正确性,传代结果显示重组病毒滴度稳定,因此成功拯救了预期的重组病毒。2不同HA和NA组合重组病毒的生物学特性及致病性研究10株重组病毒的EID50、TCID50和MDT值均相似。含SY HA的所有重组病毒,均只有α2,3唾液酸受体结合特性,与母本病毒一致。含JY HA的重组病毒中,只有JY-SY、JY表现出α2,3和α2,6唾液酸双受体结合特性。神经氨酸酶活性测定显示NA1和NA8的活性显著高于NA2。间接免疫荧光试验检测病毒感染后NP、HA蛋白的表达情况,结果显示所有重组病毒的这两种蛋白表达时序类似。激光共聚焦荧光显微镜观察所有重组病毒NP蛋白在细胞核和细胞浆的表达也类似。但流式细胞检测NP、HA、M三种蛋白表达时显示,病毒含SY HA时,H5N1亚型病毒蛋白表达量多,病毒含JY HA时,H5N2亚型病毒的蛋白表达量多,而H5N8亚型病毒的蛋白表达量则相对低。鸡的致病性试验显示,含SY HA病毒的毒力要高于含JY HA病毒,且在所有含有SY HA的病毒中,各毒株的毒力没有明显差异。但换成JY HA时,H5N2和H5N8亚型病毒的毒力要高于H5N1亚型病毒毒力。各重组病毒对小鼠致病性试验结果也表明,含SY HA病毒的毒力要高于含JYHA病毒。综上所述,禽流感病毒的HA和NA基因具有适配性,这种特性影响病毒的复制、传播和致病力。含Clade 2.3.4.4 HA的H5N2和H5N8亚型病毒对鸡的致病力增加有利于病毒的感染和传播,对病毒的流行起着重要作用。
[Abstract]:In order to adapt to the changes of host and environment , we select two different HA ( A / mallard / Huadong / S / 2005 , H5N1 ) and JY ( A / duck / Huadong / S / 2005 , H5N1 ) and JY ( A / duck / Eastern China / 2014 , H5N ) . The results showed that the virulence of H5N1 subtype virus was higher than that of NA2 . In all the recombinant viruses containing JY HA , only JY - SY and JY showed that the virulence of H5N1 subtype virus was higher than that of NA2 .
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65

【参考文献】