RNAi对绵羊颗粒细胞体外培养过程VEGF及其受体mRNA表达的影响

发布时间：2018-05-21 15:49

  本文选题：血管内皮生长因子(VEGF) + 血管内皮生长因子受体　； 参考：《南方农业学报》2017年02期

【摘要】：【目的】明确RNA干扰(RNAi)对绵羊颗粒细胞体外培养过程中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体mRNA表达的影响,为开展VEGF在绵羊卵母细胞体外成熟和胚胎发育过程中信号通路的相关研究打下基础。【方法】采用电穿孔技术将针对VEGF两个受体Flt-1和KDR/Flk-1的两条有效双链小RNA导入绵羊颗粒细胞内,利用实时荧光定量PCR检测体外培养绵羊颗粒细胞各培养时间VEGF、Flt-1和KDR/Flk-1 mRNA表达水平的变化。设定筛选出的Flt-1和KDR/Flk-1有效干扰片段分别为试验组Ⅰ和试验组Ⅱ,两个干扰片段共同作用为试验组Ⅲ,无效的干扰片段为对照组。【结果】绵羊颗粒细胞体外培养过程中,VEGF mRNA在各时间段的相对表达量是Flt-1 mRNA相对表达量的102倍、KDR/Flk-1 mRNA相对表达量的103倍;培养第1 d时,试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组ⅢVEGF mRNA相对表达量分别为2.62×10-2、3.54×10-2和2.94×10-2,均极显著高于对照组(P0.01,下同),3个试验组的VEGF mRNA表达量从第2 d开始降低,直到第6 d与对照组趋于一致。试验组ⅡFlt-1 mRNA相对表达量从培养第1 d的1.02×10-1逐渐降至第7 d的8.99×10-4,且一直极显著高于其他组;试验组Ⅰ和试验组Ⅲ在前3 d几乎无Flt-1 mRNA表达,随着培养时间的延长逐渐呈上升趋势,第8 d时各组趋于一致。试验组Ⅰ的KDR/Flk-1 mRNA相对表达量从第1 d开始极显著低于对照组;试验组Ⅱ和试验组Ⅲ在前3 d几乎无KDR/Flk-1 mRNA相对表达,随着培养时间的延长呈上升趋势,第9 d时各组趋于一致。【结论】两个有效干扰片段在绵羊颗粒细胞体外培养过程中起到很好的干扰作用,可改变VEGF、Flt-1及KDR mRNA的表达量,进而影响颗粒细胞相关生长信号的传输。
[Abstract]:[objective] to investigate the effect of RNA interference RNAi on the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor (mRNA) in sheep granulosa cells in vitro. To lay a foundation for the study of VEGF signaling pathway in ovine oocytes during in vitro maturation and embryonic development. [methods] two effective double-stranded small RNA targeting VEGF receptor Flt-1 and KDR/Flk-1 were introduced by electroporation technique. In sheep granulosa cells, The expression of VEGF Flt-1 and KDR/Flk-1 mRNA in sheep granulosa cells were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The effective interference fragments of Flt-1 and KDR/Flk-1 were selected as experimental group 鈪，

本文编号：1919824