鹅源H9N2亚型流感病毒的分离鉴定及在鸡和鹅中天然免疫差异性分析

发布时间：2018-05-24 05:28

  本文选题：H9N2亚型禽流感病毒 + 鹅　； 参考：《扬州大学》2017年硕士论文

【摘要】：H9N2亚型禽流感的遗传结构复杂多变,难以防制,已成为严重威胁中国养禽业的因素。本研究从江苏省扬州市活禽市场和扬州大学动物医院疑似禽流感病的病鹅中分离到三株鹅源H9N2亚型流感病毒,分别命名为A/Goose/Jiangsu/YZ527/2011(H9N2,缩写 Gs/JS/YZ527/11)、A/Goose/Jiangsu/SQ1 19/2012(H9N2,缩写 Gs/JS/SQ1 19/12)和A/Goose/Jiangsu/JD564/2012(H9N2,缩写 Gs/JS/JD564/12),并对这三株病毒的基因特征、对鸡和鹅的感染特性及其在鹅和鸡中诱导的天然免疫应答的差异进行了分析。基因特征结果显示,Gs/JS/SQ119/12株的HA和PB2基因分别属于G9-like分支和 G1-like 分支,Gs/JS/YZ527/1 1 和 Gs/JS/JD564/12 株的 HA 和 PB2 均属于 F/98-like 分支;Gs/JS/YZ527/1 1、Gs/JS/SQ1 19/12 和 Gs/JS/JD564/12 三株病毒的 NA、PB1、PA、NS 和 NP 基因均属于 F/98-like 分支;Gs/JS/YZ527/11 和Gs/JS/SQ1 19/12 的 M 基因属于 G1-like 分支,Gs/JS/JD564/12 的 M 基因属于F/98-like 分支,结果表明鹅源 H9N2病毒 Gs/JS/YZ527/11 株由 G1-like 和 F/98-like二个分支重组;Gs/JS/SQ119/12株是由G9-like、G1-like和F/98-like三个分支重组而成;Gs/JS/JD564/12株的8个基因全部来自F/98-like分支。3个分离株的HA基因裂解位点均为RSSR↓GLF;但是在构成受体结合位点的袋状结构的198位、233-234位氨基酸和糖基化位点有差异;与Ck/SH/F/98株相比,分离株NA基因上的红细胞吸附位点和糖基化位点均发生了变化。致病性试验表明,Gs/JS/JD564/12株都只能对一部分的鸡和鹅产生感染性,Gs/JS/JD527/1 1和Gs/JS/SQ119/12两株病毒对鸡、鹅都具有感染性。以上结果表明,同样分离自鹅的三株H9N2亚型禽流感病毒的基因组来源复杂,对鸡和鹅的感染率有显著差异。鸡和鹅分别是禽流感病毒的陆生和水生宿主,通常鸡对禽流感病毒较易感,而鹅对于禽流感病毒则有较强的抵抗能力,它们对于禽流感病毒都有其各自独特的免疫应答特征。本论文利用免疫荧光定量PCR方法,比较了本研究分离的三株鹅源H9N2亚型禽流感病毒感染鸡和鹅免疫应答的差异性。Gs/JS/SQ1 19/12株在感染鸡后第三天(3dpi),诱导鸡产生的TLR-7和IFN-γ的表达量显著上调,与未感染鸡出现明显的差异,其中Gs/JS/SQ119/12攻毒组鸡表达TLR-7和IFN-γ的量分别是未攻毒鸡的3.7倍(P0.05)和2.2倍(P0.05);而Gs/JS/SQ119/12株在感染鹅1dpi,诱导鹅表达的TLR-7的量明显升高,表达量是未攻毒鹅的4倍(P0.01)。Gs/JS/YZ527/11株在感染鸡后,只有IFN-γ的表达量在3dpi的时候有明显的上调,表达量是未攻毒鸡的2.1倍(P0.05)。表明宿主鸡启动了干扰素的抗病毒程序,但是其他因子的表达量并没有发生显著变化。Gs/JS/YZ527/11株在感染鹅1dpi,诱导鹅产生的TLR-7的表达量明显上调,其表达量是未攻毒鹅的2.3倍(P0.05)。以上结果表明Gs/JS/SQ119/12株和Gs/JS/YZ527/11株一样,在宿主鹅中启动Toll样受体的识别比在鸡中更早和更快。Gs/JS/JD564/12株在感染鸡1dpi,诱导鸡产生的TLR-7的表达量就显著上调,是未感染鸡的2.7倍(P0.05)。与Gs/JS/JD564/12株具有很高同源性的F/98株病毒,也在感染鸡1dpi诱导鸡产生的TLR-7的表达量就出现显著地上调,其表达量是未攻毒鸡的6.1倍(P0.01)。这表明鹅源Gs/JS/JD564/12株和鸡源F/98株一样,均能快速启动宿主鸡的天然免疫应答,但是F/98株在鸡中诱导的TLR-7的表达量显著高于Gs/JS/JD564/12株(P0.05)。在鹅宿主中,Gs/JS/JD564/12株在感染鹅1dpi,诱导鹅产生的TLR-21的表达量就出现了显著地上调,为未攻毒鹅的4.2倍(P0.01),并且诱导鹅产生的RIG-Ⅰ的表达量也出现显著地上调,其表达量是未攻毒鹅的4.9倍(P0.01)。表明Gs/JS/JD564/12株同样能快速地引起宿主鹅的天然免疫应答。在鸡宿主中,Gs/JS/JD564/12株与鸡源F/98株诱导IL-1β表达的速度仍然有显著差异,Gs/JS/JD564/12攻毒组鸡IL-1β的表达量是在1 dpi就显著上调,为未攻毒鸡的5.5倍(P0.01);而F/98株攻毒组鸡IL-1β的表达量在3 dpi时才开始显著上调,是未攻毒鸡的1.9倍(P0.05),表明相对于F/98株,宿主鸡能更迅速的清除Gs/JS/JD564/12株病毒。此外,感染了 Gs/JS/JD564/12株的鹅体内各因子表达量均显著高于感染了 Gs/JS/JD564/12株的鸡,这个差值在5 dpi达到最高峰。5 dpi时,Gs/JS/JD564/12株诱导宿主鹅表达的TLR-21量是宿主鸡的34.5倍(P0.01);IFN-α的表达量是宿主鸡的46倍(P0.01);IFN-γ的表达量是宿主鸡的21.6倍(P0.01);IL-1β的表达量是宿主鸡的14倍(P0.01);IL-6的表达量是宿主鸡的13.7倍(P0.01)。表明Gs/JS/JD564/12毒株不仅能迅速被宿主鹅识别,并能引发比宿主鸡更强烈的天然免疫反应,这与F/98株能引起宿主鸡产生比宿主鹅强烈的天然免疫反应的结果刚好相反。分析Gs/JS/JD564/12和F/98株的基因序列发现,两株病毒具有非常高的同源性,其HA,PB2,PB1,PA,NS,NP,M七个基因片段的同源性都达到了 99.2%以上,只有NA基因的同源性为92.7%。与F/98株相比,Gs/JS/JD564/12株的NA基因在264位新增了一个糖基化位点NIS,此位点是否与两株病毒的致病性和天然免疫反应的巨大差异有关需要进一步研究。综合以上结果发现,本研究分离的三株鹅源分离株在宿主鹅中诱导的天然免疫应答强于其在宿主鸡中的天然免疫应答。
[Abstract]:The results showed that the HA and PB2 genes of Gs / JS / SQ119 / 12 and Gs / JS / SQ1 19 / 12 and Gs / JS / JD564 / 12 belong to F / 98 - like branches . The results showed that the expression of TLR - 7 and IFN - 纬 in chickens and geese was significantly higher than that of chickens and geese . The results showed that Gs / JS / SQ1 19 / 12 strains could only produce infectivity to chickens and geese . Compared with F / 98 strain , the expression of IL - 1尾 and IL - 1尾 in the host chicken were significantly higher than that of the host chicken ( P0.01 ) .
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

【参考文献】

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本文编号：1927851