应用酵母双杂交系统筛选与流感病毒PB2蛋白相互作用的宿主蛋白

发布时间：2018-05-26 11:59

  本文选题：流感病毒 + PB蛋白　； 参考：《中国预防兽医学报》2017年01期

【摘要】：流感病毒PB2蛋白可以作用于病毒mRNA转录起始阶段,辅助病毒mRNA引物的合成,并能够影响病毒的宿主范围,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。本研究利用2009甲型H1N1流感病毒PB2蛋白作为"诱饵"蛋白,通过经典酵母双杂交系统筛选由Calu-3、A549、THP-1和U251 4种细胞构建的cDNA文库,筛选到多个与PB2蛋白相互作用的宿主蛋白。针对其中筛选到的一种宿主蛋白FHL2,进行免疫共沉淀(Co-IP)和激光共聚焦(Confocal)试验,证实了PB2蛋白和FHL2蛋白二者之间存在相互作用,并且转染瞬时过表达FHL2发现该蛋白可以负调控流感病毒复制,为进一步研究PB2蛋白与FHL2蛋白互作及影响病毒复制的分子机制奠定了基础。
[Abstract]:Influenza virus PB2 protein can act on the initial stage of viral mRNA transcription, assist the synthesis of virus mRNA primers, affect the host range of the virus, and participate in the adaptation process of avian influenza virus in mammalian host. In this study, the PB2 protein of 2009 H1N1 influenza virus was used as the "bait" protein, and the cDNA library constructed from four kinds of cells, Calu-3A549THP-1 and U251, was screened by the classical yeast two-hybrid system, and several host proteins interacting with PB2 protein were screened out. A host protein, FHL2, was identified by co-immunoprecipitation (Co-IP) and laser confocal assay, which confirmed the interaction between PB2 protein and FHL2 protein. The transient overexpression of FHL2 showed that the protein could negatively regulate influenza virus replication, which laid a foundation for further study on the interaction between PB2 protein and FHL2 protein and the molecular mechanism affecting virus replication.
【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室;甘肃农业大学动物医学学院;
【基金】：国家自然科学基金(31472215、31521005)
【分类号】：S852.65

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本文编号：1937158