猪圆环病毒1型微滴数字PCR定量检测方法的建立

发布时间：2018-06-23 22:45

  本文选题：猪圆环病毒Ⅰ型 + 微滴数字PCR　； 参考：《中国兽医学报》2017年11期

【摘要】：以猪圆环病毒1型ORF1基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法。对ddPCR反应中的探针浓度进行了优化。结果显示:ddPCR反应中的最佳探针浓度为250nmol/L;ddPCR方法线性相关系数(R2)为0.999,呈良好的线性关系;检测限为7.8copies/20μL;变异系数为2.7%;与其他病毒无交叉反应。通过对临床样品的检测,检测结果与实时荧光PCR结果一致。结果表明:新建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强,可用于猪圆环病毒1型的定量检测。
[Abstract]:Using ORF1 gene of porcine circovirus type 1 as the target gene, an accurate and quantifiable microdrop (droplet digital PCR PCR method was established. The probe concentration in ddPCR reaction was optimized. The results showed that the optimal probe concentration was 250nmol / LddPCR with a linear correlation coefficient (R2) of 0.999 9, a detection limit of 7.8copies/20 渭 L, a coefficient of variation of 2.7%, and no cross reaction with other viruses. The detection results of clinical samples were consistent with the results of real-time fluorescence PCR. The results showed that the new ddPCR method was highly sensitive and specific, and could be used for quantitative detection of porcine circovirus type 1.
【作者单位】： 中国动物疫病预防控制中心OIE猪繁殖与呼吸综合征参考实验室;中国农业大学动物医学院;
【基金】：科技部科技基础性工作专项(2013FY113300-6)
【分类号】：S852.651

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