姬松茸多糖对镉中毒鸡外周血淋巴细胞和脾脏中MDA5信号通路及抗氧化水平的影响

发布时间：2018-06-29 13:39

本文选题：镉 + 姬松茸多糖　；参考：《东北农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：镉(Cd)中毒后,可对人和动物的心血管、肝、肾、生殖系统及免疫器官造成损伤。姬松茸多糖(ABP)是从姬松茸中提取的具有免疫调节、抗氧化和抗炎症等生物学活性的一种多糖。本试验以7日龄海兰白鸡为研究对象,在建立鸡镉中毒模型的基础上,研究ABP对镉中毒鸡外周血淋巴细胞和脾脏MDA5信号通路及抗氧化功能的影响,以期明确ABP对镉中毒鸡外周免疫损伤的干预机制。将80只7日龄海兰白鸡随机分成四组,即对照组(Control)、镉中毒模型组(Cd)、姬松茸多糖组(ABP)和镉+姬松茸多糖组(Cd+ABP)。Control组,饲喂正常全价饲料,每只灌注0.2 mL生理盐水;Cd组,饲喂混有140 mg/Kg Cd Cl2的正常全价饲料,连续饲喂2个月;ABP组,饲喂正常全价饲料,同时每天口服0.2 m L ABP(浓度为30 mg/mL);Cd+ABP组,即Control组和ABP组结合,分别在第20天、第40天和第60天取样。首先,每组随机抽取5只鸡进行心脏采血,用于分离淋巴细胞和收集血清;快速分离脾脏,取部分固定于4%多聚甲醛溶液中。分离的淋巴细胞与剩余的脾脏分成四部分,一部分用电感耦合等离子质谱法检测镉含量;对一部分淋巴细胞和脾脏进行总RNA的提取,反转录成c DNA,通过实时荧光定量PCR法检测MDA5及信号转导通路衔接蛋白IPS-1、转录因子(IRF3、NF-κB)的m RNA水平;对另部分淋巴细胞和脾脏进行蛋白的提取,用Western Blot法检测MDA5蛋白表达;将剩余的淋巴细胞用1640完全培养液培养24 h,收集上清,剩余的脾脏用生理盐水进行匀浆,一同用ELISA方法分别检测细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-β的含量;检测淋巴细胞培养上清液和脾脏匀浆抗氧化指标(SOD、MDA和GSH-Px);并对鸡脾脏进行病理组织学检测。结果发现:(1)Cd+ABP组鸡外周血液和脾脏中镉含量较Cd组极显著降低(P0.01);(2)镉中毒后鸡外周血淋巴细胞和脾脏中MDA5的mRNA水平和蛋白表达均有升高,且随着镉中毒时间的增加MDA5的表达量也随之增加,而灌服ABP后其表达量有明显的下调;MDA5信号通路相关分子IPS-1、IRF3、NF-κB的表达变化规律与MDA5相同;(3)Cd组鸡外周血淋巴细胞和脾脏中细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-β含量升高,且均极显著高于Control组和ABP组(P0.01),口服ABP后这些细胞因子含量均极显著下调(P0.01);(4)Cd+ABP鸡外周血淋巴细胞上清液和脾脏中MDA含量极显著降低(P0.01),SOD和GSH-Px活性极显著升高(P0.01);(5)镉中毒后鸡脾脏病理组织学变化表现为淋巴细胞数量明显减少,红髓、白髓界限不清,而Cd+ABP组鸡脾脏结构较Cd组有明显改善,淋巴细胞数量增多,且细胞排列紧凑,红髓、白髓界限较清晰。综上所述,ABP能减少镉在鸡外周血液和脾脏中的蓄积,降低镉中毒鸡外周血淋巴细胞中MDA5及其下游信号分子的表达及细胞因子含量,显著提高抗氧化酶(SOD、GSH-Px)的活性,降低MDA含量,ABP对镉中毒造成的鸡外周血淋巴细胞和脾脏的损伤有一定的保护作用。本研究为进一步探讨ABP干预镉中毒导致机体损伤机制提供了科学依据。
[Abstract]:The effects of ABP on peripheral blood lymphocytes and spleen MDA5 signaling pathway and anti - oxidation function were studied by means of real - time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ( RT - PCR ) . The levels of IL - 1尾 , IL - 6 , TNF - 伪 and IFN - 尾 in peripheral blood and spleen of chicken were significantly lower than those in control group and ABP group ( P0.01 ) .
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S859.8

【参考文献】