JSRV-Env真核表达产物与体外细胞作用后对细胞信号通路中关键酶的影响

发布时间：2018-07-10 01:15

本文选题：JSRV-Env + TC-1细胞　；参考：《内蒙古农业大学》2015年硕士论文

【摘要】：背景：绵羊肺腺瘤(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引发的一种接触传染性肺脏肿瘤疾病。env基因是JSRV的癌基因,透明质酸酶2 (Hyal-2)是JSRV的作用受体。JSRV的囊膜蛋白(Env)转化NIH 3T3细胞是通过其胞质尾(CT)直接激活信号通路；而Env转化上皮细胞,是先与其受体Hyal-2结合,进而激活下游细胞信号通路。目的：绵羊Hyal-2是JSRV Env诱导细胞转化的受体,研究绵羊Hyal-2与Env之间的相互作用,对于揭示JSRV致瘤机理具有重要意义。方法：1.采用绵羊Hyal-2基因真核表达质粒pDsRed-monomer-N1-Hyal-2转染TC-1细胞,经G418筛选、纯化,构建稳定表达绵羊Hyal-2的TC-1细胞系。在核酸水平及蛋白水平上分别利用RT-PCR方法和Western blot方法验证Hyal-2在TC-1细胞内表达的稳定性,并通过激光共聚焦显微镜来观察载体自带红色荧光来确定Hyal-2蛋白在细胞内的定位。2.采用pEGFP-C1-env瞬时转染TC-1细胞、TC-1-Hyal2细胞和NIH 3T3细胞。通过RT-PCR方法和Western blot方法验证Env在上述3种细胞内的表达,同样使用激光共聚焦来观察Env在上述3种细胞内的定位。3.转染pEGFP-C1-env后,通过荧光定量PCR和Western blot方法分别检测其对细胞中AKT、ERK和TERT表达量的影响。结果及结论：1.建立了稳定表达绵羊Hyal-2蛋白的TC-1细胞系,命名为TC-1-Hyal2。2.完成了pEGFP-C1-env真核表达质粒瞬时转染NIH 3T3细胞、TC-1细胞和TC-1-Hyal2细胞。3.转染pEGFP-C1-env后,TC-1-Hyal2细胞和TC-1细胞中AKT、ERK和TERT表达量均升高,并且在TC-1-Hya12细胞中的表达量比TC-1细胞中升高更显著。4.绵羊Hyal-2蛋白具有促进JSRV Env诱导TC-1细胞转化的作用。
[Abstract]:BACKGROUND : The env gene is the oncogene of JSRV , which is one of JSRV ' s oncogene . The envelope protein ( Env ) of JSRV is transformed into NIH 3T3 cell to directly activate signal path through its cytoplasmic tail ( CT ) ;
The results and conclusions were as follows : 1 . We established TC - 1 cell line , TC - 1 - Hyal2 cells and NIH 3T3 cells by RT - PCR and Western blot .
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.26

【参考文献】