猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备及特性分析

发布时间：2018-07-10 06:25

  本文选题：猪流行性腹泻病毒 + 单克隆抗体　； 参考：《福建农业学报》2017年08期

【摘要】：为制备猪流行性腹泻病毒(PDEV)的单克隆抗体,并鉴定单克隆抗体特性。本试验采用差速和蔗糖梯度离心纯化PEDV抗原,免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经ELISA方法筛选和细胞克隆,得到能分泌鼠抗PEDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备出相应的单克隆抗体,并分析其特性。试验结果:获得2株能稳定分泌抗PEDV的单克隆抗体,命名为E1和H6株,其中E1单隆抗体为IgG2a亚型,H6单隆抗体为IgM亚型,2株单克隆抗体均具有IFA、ELISA和Western bloting特性。E1杂交瘤细胞株的细胞上清液和腹水的ELISA抗体效价分别26和105,H6杂交瘤细胞株的细胞上清液和腹水的ELISA抗体效价分别24和104。2株单克隆抗体与Vero细胞、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均无交叉反应。Western bloting测定结果表明,E1株单克隆抗体能识别PEDV的M蛋白,H6单克隆抗体能识别PEDV的N蛋白。PEDV单克隆抗体的成功研制,为PEDV免疫诊断、表位识别及蛋白研究奠定了良好基础。
[Abstract]:To prepare monoclonal antibody against porcine epidemic diarrhea virus (PDEV) and to identify its characteristics. In this experiment, PEDV antigen was purified by differential centrifugation and sucrose gradient centrifugation. Balb / c mice were immunized. The spleen cells of immunized mice were fused with SP2 / 0 cells. The hybridoma cell lines secreting monoclonal antibody against PEDV were obtained by Elisa screening and cell cloning. The corresponding monoclonal antibodies were prepared and their properties were analyzed. Results: two monoclonal antibodies against PEDV were obtained, named E1 and H6. The monoclonal antibodies against E1 Monoclonal antibody were IgG2a subtype H6 Monoclonal antibody. Both McAbs had IFA Elisa and Western bloting characteristics. Elisa titers of supernatant and ascites of hybridoma cell line of E1 were 26 and 105 H6 hybridoma cell lines, respectively. The titers of Elisa antibody in supernatant and ascites were 24 and 104.2 strains, respectively. Transmissible gastroenteritis virus (TGEV), classical swine fever virus (CSFV) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSv) were not cross-reacted. Western bloting analysis showed that monoclonal antibody against E1strain could recognize the M protein of PEDV and the N protein of PEDV. Successful development of monoclonal antibodies against PEDV, It has laid a good foundation for PEDV immune diagnosis, epitope recognition and protein research.
【作者单位】： 福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心;
【基金】：福建省自然科学基金项目(2015J01112) 福建省科技创新平台建设项目(2014N2003) 福建省科技计划项目——省属公益类科研院所基本科研专项(2014R1023-7)
【分类号】：S852.651

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本文编号：2112424